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In Vitro gerichtete Evolution einer Restriktionsendonuklease mit strengerer Spezifität
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In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity
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In Vitro gerichtete Evolution einer Restriktionsendonuklease mit strengerer Spezifität

Deutsch

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09:16 min

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March 25, 2020

DOI:

10.3791/60807-v

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10.3791/60807-v

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March 25, 2020

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1International Institute of Molecular and Cell Biology, Warsaw (IIMCB)

Summary

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Restriktionsendonukleasen mit neuer Sequenzspezifität können aus Enzymen entwickelt werden, die eine teilweise degenerierte Sequenz erkennen. Hier stellen wir ein detailliertes Protokoll zur Verfügung, das wir erfolgreich verwendet haben, um die Sequenzspezifität des NlaIV-Enzyms zu verändern. Wesentliche Bestandteile des Protokolls sind die In-vitro-Kompartimentisierung der Transkriptions-/Übersetzungsreaktion und die Auswahl von Varianten mit neuen Sequenzspezifitäten.

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Skowronek, K. J., Bochtler, M. In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity. J. Vis. Exp. (157), e60807, doi:10.3791/60807 (2020).

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