Restriktionen endonucleases med ny sekvens specificitet kan udvikles fra enzymer, der genkender en delvist degenereret sekvens. Her giver vi en detaljeret protokol, som vi med succes har brugt til at ændre sekvensspecificiteten af NlaIV-enzymet. De vigtigste ingredienser i protokollen er in vitro-opdelingen af transskriptions-/oversættelsesreaktionen og udvælgelsen af varianter med nye sekvensspecificiteter.
Skowronek, K. J., Bochtler, M. In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity. J. Vis. Exp. (157), e60807, doi:10.3791/60807 (2020).