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Engenharia 'Dourada' fluorescência por pressão seletiva de incorporação de aminoácidos não-canônicos e análise de proteínas por espectrometria de massa e fluorescência
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Engineering ‘Golden’ Fluorescence by Selective Pressure Incorporation of Non-canonical Amino Acids and Protein Analysis by Mass Spectrometry and Fluorescence

Engenharia 'Dourada' fluorescência por pressão seletiva de incorporação de aminoácidos não-canônicos e análise de proteínas por espectrometria de massa e fluorescência

português

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11:51 min

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April 27, 2018

DOI:

10.3791/57017-v

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April 27, 2018

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1Institute of Chemistry L 1, Department of Biocatalysis,Technical University of Berlin, 2Institute of Chemistry PC 14, Department of Bioenergetics,Technical University of Berlin, 3Institute of Chemistry TC 7, Department of Physical Chemistry/Molecular Material Sciences,Technical University of Berlin

Summary

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Biologia sintética permite a engenharia de proteínas com propriedades sem precedentes usando a inserção co-translational de aminoácidos não-canônicas. Aqui, apresentamos como uma variante espectralmente avermelhado de um fluoróforo GFP-tipo com propriedades espectroscópicas de fluorescência romance, denominado proteína fluorescente "ouro" (GdFP), é produzida em Escherichia coli através de incorporação de pressão seletiva (SPI).

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Selective Pressure IncorporationNon-canonical Amino AcidsRecombinant Protein ProductionFluorescent ProteinMass SpectrometryFluorescenceProtein EngineeringAuxotrophic E. ColiNMM19 MediumECFP

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Baumann, T., Schmitt, F., Pelzer, A., Spiering, V. J., Freiherr von Sass, G. J., Friedrich, T., Budisa, N. Engineering 'Golden' Fluorescence by Selective Pressure Incorporation of Non-canonical Amino Acids and Protein Analysis by Mass Spectrometry and Fluorescence. J. Vis. Exp. (134), e57017, doi:10.3791/57017 (2018).

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