הכתמה עם סיפוח V ו propidium יודיד (PI) מספק לחוקרים דרך לזהות סוגים שונים של מוות תאים – נמק או אפופטוזיס. טכניקה זו מסתמכת על שני מרכיבים. הראשון, annexin V, הוא חלבון הקושר פוספוליפידים מסוימים הנקראים פוספטידילסרינים, המתרחשים בדרך כלל רק בעלון הפנימי הפונה לציטופלזמה של קרום התא, אך הופכים “הפוכים” לעלון החיצוני בשלבים המוקדמים של אפופטוזיס. המרכיב השני הוא PI של מולקולת צבע מחייבת דנ”א, שיכולה להיכנס לתאים רק כאשר הקרומים שלהם נקרעים – מאפיין של נמק ואפופטוזיס מאוחר.
מאמר וידאו זה מתחיל בסקירה של המושגים שמאחורי הכתמת ה- ANNEXin V ו- PI, ומדגיש כיצד ניתן להשתמש בדפוסי הכתמים דיפרנציאליים כדי להבחין בין תאים המתקדמים בנתיבי מוות שונים. לאחר מכן אנו בודקים פרוטוקול כללי לטכניקה זו, ואחריו תיאור של האופן שבו חוקרים משתמשים כיום בכתמי נספח V ו- PI כדי להבין טוב יותר את המוות בתאים.
Procedure
תיוג נספח V ו- propidium iodide (PI) של תאים היא טכניקה המשמשת לזיהוי מוות תאים, ולהבדיל בין המסלולים השונים שלה: אפופטוזיס, או מוות תאים מתוכנת, ונמק. תאים עוברים שינויים מורפולוגיים ברורים בהתאם למסלול. על ידי זיהוי התנאים הספציפיים המובילים תא לעבור אפופטוזיס או נמק, מדענים מקבלים תובנה על פיזיולוג…