Muitos experimentos biomédicos requerem manipulação de uma quantidade conhecida de células, a fim de alcançar dados precisos, reprodutíveis e estatisticamente relevantes. Portanto, aprender a contar células é uma técnica particularmente essencial para qualquer cientista biomédico bem sucedido. A maneira mais comum de contar células é usando um hemacítmetro – um instrumento que carrega duas grades gravadas a laser, que ajudam na enumeração de uma célula aliquot sob um microscópio de luz simples. Esses dados podem então ser usados para extrapolar o número de células em amostras experimentais.
Este vídeo mostrará como: ajustar a concentração experimental da amostra para que você não esteja tentando contar muitas – ou poucas – células; como usar um hemacítômetro para contar uma pequena alíquota (~10 μl) de células; como determinar qual quadrante da grade laser hemacítômetro usar para contagem; como calcular o número total de células em sua amostra experimental, dependendo do qual quadrante foi utilizado; e como determinar a viabilidade de sua população celular experimental usando a exclusão azul trypan. Além disso, também são discutidas várias situações experimentais para as quais é necessária uma determinação confiável e precisa dos números de células, incluindo um exemplo usando um contador automatizado de células.
Procedure
A contagem de células é um passo importante em muitos ensaios baseados em células para determinar o número e a viabilidade da célula. Em geral, o objetivo da contagem é entender o quanto uma amostra de uma concentração celular desconhecida deve ser diluída para uso posterior. A ferramenta de laboratório mais comum para contar células é o hemacytómetro. O hemacítmetro é uma ferramenta de contagem que foi originalmente criada para contar células sanguíneas. No centro do hem…