Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates

Faiza Waheed; Pamela Speight; Qinghong Dan; Rafael Garcia-Mata; Katalin Szaszi

doi:10.3791/3932

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Afinidad La precipitación de los activos Rho GEFs El uso de un GST-etiquetados mutante de la proteína Rho (GST-RhoA (G17A)) a partir de lisados de células epiteliales

JoVE Journal
Biology

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Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates

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Afinidad La precipitación de los activos Rho GEFs El uso de un GST-etiquetados mutante de la proteína Rho (GST-RhoA (G17A)) a partir de lisados de células epiteliales

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11:28 min

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March 31, 2012

DOI:

10.3791/3932-v

DOI:

10.3791/3932-v

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11:28 min

March 31, 2012

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Faiza Waheed^1,2, Pamela Speight^1,2, Qinghong Dan^1,2, Rafael Garcia-Mata³, Katalin Szaszi^1,2

¹Keenan Research Centre, Li Ka Shing Knowledge Institute,St. Michael’s Hospital , ²Department of Surgery,University of Toronto, ³Department of Cell and Developmental Biology,University of North Carolina at Chapel Hill

Summary

El método aquí presentado describe un ensayo para seguir la activación de RhoA específicos PIB / GTP Factores de cambio (GEFS) en células cultivadas, haciendo uso de una proteína de fusión GST RhoA mutante que tiene una alta afinidad por GEFs activados. GEFs se precipitan a partir de lisados celulares, detectados por Western Blot y cuantificados por densitometría.

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Affinity Precipitation Rho-GEFs GST-tagged Mutant Rho Protein Cytoskeleton Regulation Cellular Processes GTPases Guanine-nucleotide Exchange Factor Pathway-specific Regulation Regulatory Networks Active Pool Of GEFs Affinity Precipitation Assay Burridge Lab

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