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Précipitation par affinité des actifs des Rho GEF l'aide d'un TPS-étiqueté Mutant Rho protéines (TPS-RhoA (G17A)) à partir de lysats cellulaires épithéliales
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Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates
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Précipitation par affinité des actifs des Rho GEF l'aide d'un TPS-étiqueté Mutant Rho protéines (TPS-RhoA (G17A)) à partir de lysats cellulaires épithéliales

français

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11:28 min

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March 31, 2012

DOI:

10.3791/3932-v

DOI:
10.3791/3932-v

•

11:28 min
March 31, 2012

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1Keenan Research Centre, Li Ka Shing Knowledge Institute,St. Michael’s Hospital , 2Department of Surgery,University of Toronto, 3Department of Cell and Developmental Biology,University of North Carolina at Chapel Hill

Summary

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La méthode présentée ici décrit un dosage de suivre l'activation de RhoA facteurs spécifiques de change GDP / GTP (GEF) dans les cellules cultivées en faisant usage d'une protéine mutante RhoA fusion GST qui a une forte affinité pour GEFs activés. GEF sont précipités à partir de lysats cellulaires, détectées par Western blot et quantifiée par densitométrie.

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Affinity PrecipitationRho-GEFsGST-tagged Mutant Rho ProteinCytoskeleton RegulationCellular ProcessesGTPasesGuanine-nucleotide Exchange FactorPathway-specific RegulationRegulatory NetworksActive Pool Of GEFsAffinity Precipitation AssayBurridge Lab

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Waheed, F., Speight, P., Dan, Q., Garcia-Mata, R., Szaszi, K. Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates. J. Vis. Exp. (61), e3932, doi:10.3791/3932 (2012).

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