This content is Free Access.
Chapters
- 00:00Title
- 01:38Introduction
- 02:30Experimental Design
- 03:58Immobilization of the Ligand Papain for CFCA Analysis
- 07:34Determining Cystatin B Concentration Using the CFCA Assay
- 11:07Measuring the Kinetics of Cystatin B binding to Papain
- 17:13CFCA assay and Kinetics of Cystatin B binding to Papain Representative Results
- 18:47Conclusion
Мы применяем без наклеек анализа взаимодействия белков использованием Biacore X100 для структуры и функции анализа связывания нескольких мутантов B цистатина к папаин через кинетические характеристики. Калибровка без анализа концентрации (ЦАФД) измеряет концентрацию белка с сохраненными связывающей активностью без необходимости использования стандартной кривой. Мы покажем, что подтверждение концентраций с использованием ЦАФД повышает надежность кинетического анализа и кинетических констант может надежно определить, даже если активность рекомбинантного белка снижается.
Tags
Protein ConcentrationKineticsAffinity DeterminationStructure-function AnalysisCysteine Protease InhibitorCystatin BPapainReal-time Label-free AnalysisBiacore X100Point MutationsInteractionCalibration-free Concentration Analysis (CFCA)A280Single-cycle Kinetics (SCK)Association Rate Constant (ka)Affinity (KD)Reliable ResultsInteraction Mechanism
