Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Modifica chimica del residuo di triptofano in un dominio N Ricombinante Ca2+-ATPasi per lo studio del triptofano-ANS FRET
Bölümler
- 00:03Introduction
- 01:15Determination (in silico) of the ANS and SERCA N‐Domain Interaction
- 03:09Expression and Purification of the Recombinant N‐Domain
- 03:39Monitor the Formation of the ANS‐N‐Domain Complex Based on ANS and N‐Domain Fluorescence Intensity Changes
- 07:38N‐Domain Intrinsic Fluorescence Titration by Trp Chemical Modification with NBS
- 08:43Titrate the NBS Modified N‐Domain with ANS by Recording Fluorescence Spectra at 25°C
- 09:37Evidence of ANS Binding to the Chemically Modified N‐Domain by Excitation at λ = 370 nm
- 10:32Results Overview
- 11:30Conclusions
ANS si lega al dominio N ricombinante Ca2+-ATPasi. Gli spettri di fluorescenza mostrano un modello simile a FRET all'eccitazione ad una lunghezza d'onda di 295 nm. La modifica chimica mediata da NBS di Trp spegne la fluorescenza del dominio N, che porta all'assenza di trasferimento di energia (FRET) tra il residuo Trp e ANS.
