Méthode simple de flottation fécale pour diagnostiquer les nématodes zoonotiques sur le terrain et en laboratoire

Les parasites gastro-intestinaux sont l’un des problèmes de santé les plus courants qui affectent les chiens¹. Les estimations suggèrent qu’il y a ~700 millions de chiens domestiques dans le monde, et environ 175 millions peuvent être classés comme en liberté². Plus de 60 espèces de parasites sont partagées entre les chiens et les humains, ce qui suggère que les chiens pourraient être une source d’infection pour les humains par ces parasites³. Toxocara canis et Ancylostoma caninum sont deux espèces parasites qui infectent les chiens et, accidentellement, les hôtes humains. Actuellement, il existe plusieurs études sur les endroits où ces helminthes sont capables de survivre et de se reproduire au Mexique. La prévalence de Toxocara chez les chiens varie de 0 % à plus de 87 % aux États-Unis, au Mexique, en Amérique centrale et dans les Caraïbes⁴. Toxocara canis et Ancylostoma spp., ainsi que d’autres espèces parasites chez les chiens, ont déjà été signalés au Mexique 5,6,7,8,9,10,11,12,13 (tableau 1).

Tableau 1 : Prévalence régionale (%) des parasites canins au Mexique de 2001 à 2020. Les résultats d’enquêtes antérieures menées de 2001 à 2020 ont permis d’identifier la distribution des parasites canins dans plusieurs milieux urbains et ruraux au Mexique. Ces études permettent de comprendre en profondeur les éléments épidémiologiques propices à la persistance des parasites canins dans différents écosystèmes, contribuant ainsi à une évaluation complète de l’impact zoonotique de certaines espèces parasitaires.

Les stades du cycle de vie des parasites intestinaux, tels que les œufs, les kystes, les oocystes ou les larves, peuvent être trouvés dans les échantillons de selles. Ainsi, l’examen des matières fécales fournit des informations précieuses sur les parasites d’un animal. Le besoin d’une méthode pour détecter les œufs d’Ancylostomidae dans les excréments humains a conduit à l’utilisation du simple frottis fécal en 1878, qui a été utilisé pendant de nombreuses années pour détecter les parasites gastro-intestinaux mais était considéré comme peu sensible. Ainsi, le besoin s’est fait sentir de développer de meilleures méthodes copromicroscopiques¹⁴. Plus de 100 ans se sont écoulés depuis que la technique de flottation pour récupérer et compter les œufs de parasites dans les échantillons fécaux a été décrite pour la première fois¹⁵. Depuis lors, plusieurs méthodes et variantes de la technique de flottation ont été considérées comme un standard pour la détection de certains parasites chez leurs hôtes.

Par exemple, Lane a décrit en 1924 une méthode impliquant la technique de flottation centrifuge directe, qui intègre la centrifugation suivie de la flottaison du sédiment dans une solution saturée de chlorure de sodium avec SpG 1,2 dans 1 g (Lane) ou 10 g (modification de Stoll). La technique de flottation a ensuite été modifiée en utilisant des solutions avec différents SpG¹⁴. En 1939, Gordon et Whitlock ont signalé les inconvénients de la technique de Stoll en raison de l’interférence des détritus dans la visualisation des œufs de parasites et ont développé la méthode quantitative connue sous le nom de McMaster¹⁶. En 1979, O’Grady et Slocombe ont démontré que la densité de la solution, le moment et la taille des mailles des crépines affectent la précision de la détection des œufs à l’aide de la technique de flottation¹⁷. Au cours des dernières décennies, plusieurs modifications ayant été apportées à la technique de flottation, il est urgent de normaliser les méthodes de flottation. Actuellement, la détection des helminthes canins dans le cadre de la prévention des parasites zoonotiques est nécessaire pour appliquer des traitements anthelminthiques appropriés afin de limiter la contamination de l’environnement par les stades infectieux des nématodes zoonotiques¹⁸.

Parmi les méthodes qualitatives, la technique de flottation fécale est largement utilisée et acceptée car elle ne nécessite pas beaucoup d’équipement, est simple, peu coûteuse et reproductible ; Pourtant, il présente un inconvénient majeur en ce sens qu’il manque de sensibilité lorsque l’intensité de l’infection est faible¹⁹. La capacité à révéler la présence d’un plus grand nombre d’éléments parasites tels que des œufs, des oocystes, des kystes ou des larves de nématodes est généralement déterminée par la densité de la solution²⁰.

Des rapports antérieurs ont comparé les techniques coproparasitologiques pour la détection des œufs de nématodes canins. En ce qui concerne la détection des protozoaires mobiles, des frottis fécaux directs sont utilisés ; tandis que les méthodes de sédimentation sont utiles pour diagnostiquer les œufs lourds de parasites tels que les trématodes²¹. L’un des tests de diagnostic sur le terrain les plus utilisés est la méthode du frottis fécal. Cependant, le faible niveau de sensibilité de cette technique peut être attribué au fait qu’elle contient des débris qui interfèrent avec la détection des œufs de parasites. En incorporant une étape de tamisage avec des solutions qui fournissent la bonne SpG, la méthode de flottation offre une observation plus claire et moins encombrée des œufs d’ascarides et d’ankylostomes. Cela conduit à un processus plus précis et plus efficace pour le criblage microscopique²². De même, les techniques simples de flottation et de flottation centrifuge directe sont très couramment utilisées pour récupérer les œufs et les oocystes de parasites¹⁴. Les méthodes de flottation classiques peuvent être considérées comme qualitatives ou quantitatives selon l’utilisation d’une chambre de comptage telle que la méthode McMaster¹⁵. Néanmoins, comme la technique de flottation a une faible sensibilité et se concentre sur la détection des parasites pendant la période du brevet, les résultats négatifs ne doivent pas être considérés comme concluants. Cependant, la précision ne dépend pas seulement de la procédure de conservation des échantillons fécaux ou de la SpG des solutions de flottation, mais aussi de la compétence technique et de l’expérience de l’utilisateur dans la réalisation d’examens fécaux.

Par conséquent, d’autres méthodes ont été explorées pour la détection des parasites canins dans les matières fécales. Il est généralement reconnu que l’une des approches les plus utilisées pour le diagnostic des helminthes intestinaux chez le chien est la technique FLOTAC, une méthode polyvalente, sensible et précise qui donne des résultats précis et fiables pour le diagnostic d’A. caninum chez le chien par rapport à un protocole de flottaison en tube et à la technique McMaster^{19, 23}. Les méthodes de sédimentation sont utiles pour récupérer les œufs de douve, les œufs de nématodes embryonnés et la plupart des œufs de ténia, qui ne peuvent pas être récupérés à la surface d’une solution de flottation car ces structures ne flottent pas²⁴. Une méthode qui s’est avérée supérieure aux techniques de flottation/sédimentation est la méthode de flottation double centrifuge modifiée, car elle permet de détecter les œufs de cestodes dans les matières fécales, prend moins de temps, sépare les œufs d’Anoplocephala des débris fécaux et diminue la cristallisation²⁵. De plus, cette technique a été utilisée avec succès pour détecter les œufs d’ascarides avec une grande sensibilité²⁶. Pourtant, certaines de ces techniques et méthodes centrifuges telles que l’Ovassay, par opposition au protocole de flottation que nous proposons dans cette étude, nécessitent la conservation des échantillons dans des réactifs tels que le formol, des kits commerciaux, le traitement des échantillons dans des conditions de laboratoire et l’utilisation de réactifs tels que le sulfate de zinc²⁷ qui sont coûteux et nécessitent des procédures d’élimination spéciales pour éviter la toxicité environnementale.

L’utilisation de techniques qui augmentent la sensibilité de la méthode de flottation en ajoutant des solutions à forte SpG a été favorisée récemment. Cependant, il faut considérer que l’inconvénient de ces solutions est l’augmentation des débris dans la préparation finale et donc la détection imprécise des œufs de parasites. De plus, la disponibilité commerciale des matériaux, des réactifs, le coût, les problèmes d’impact environnemental et la difficulté d’utilisation des méthodes centrifuges affectent le choix d’une technique de flottation¹⁴, qui peut être difficile dans des conditions de terrain contrairement au protocole que nous présentons dans ce travail. La préparation des solutions de flottation avec du sel de table est avantageuse par rapport à l’utilisation du sucre car, dans des conditions de terrain, le sucre attire les insectes tels que les guêpes et les abeilles et les préparations deviennent collantes. De plus, des solutions telles que le phénol, qui est ajouté aux solutions sucrées pour éviter l’adhérence, ou le ZnSO₄sont complexes à éliminer correctement conformément aux directives de protection de l’environnement et ne peuvent pas être éliminées sur le terrain ; contrairement à une solution de sel de table.

L’objectif de ce manuscrit est de démontrer les étapes de détection des œufs de T. canis et d’Ancylostoma spp. dans des échantillons fécaux en utilisant une adaptation de la technique de flottation simple dans des conditions de terrain et de laboratoire. En suivant le protocole décrit ci-dessous et en utilisant un microscope avec une batterie de secours, le diagnostic de ces parasites zoonotiques canins dans les zones rurales et périurbaines est possible lorsqu’aucun équipement et infrastructure de laboratoire n’est disponible. La méthode de flottation simple décrite dans ce travail peut fournir des résultats rapides et constitue une technique non invasive et rentable pour le dépistage de routine.