طريقة بسيطة لتعويم البراز لتشخيص الديدان الخيطية الحيوانية المنشأ تحت الظروف الحقلية والمخبرية

الطفيليات المعدية المعوية هي واحدة من أكثر المشاكل الصحية شيوعا التي تصيب¹. تشير التقديرات إلى أن هناك ~ 700 مليون محلي في جميع أنحاء العالم ، ويمكن تصنيف ما يقرب من 175 مليون على أنها تجوال^{مجاني 2}. يتم مشاركة أكثر من 60 نوعا من الطفيليات بين والبشر ، مما يشير إلى أن يمكن أن تكون مصدرا لعدوى البشر بهذه الطفيليات³. Toxocara canis و Ancylostoma caninum نوعان طفيليان يصيبان ، وعن طريق الخطأ ، المضيفين البشريين. حاليا ، هناك العديد من الدراسات حول المواقع التي تستطيع فيها هذه الديدان الطفيلية البقاء والتكاثر في المكسيك. يختلف انتشار التوكسوكارا في من 0٪ إلى أكثر من 87٪ في جميع أنحاء الولايات المتحدة والمكسيك وأمريكا الوسطى ومنطقة البحر الكاريبي⁴. تم الإبلاغ سابقا عن Toxocara canis و Ancylostoma spp. ، بالإضافة إلى الأنواع الطفيلية الأخرى في ، في المكسيك^{5،6،7،8،9،10،11،12،13} (الجدول 1).

الجدول 1: الانتشار الإقليمي (٪) لطفيليات في المكسيك من 2001 إلى 2020. مكنت نتائج التحقيقات السابقة التي أجريت في الفترة من 2001 إلى 2020 من تحديد توزيع طفيليات عبر العديد من المناطق الحضرية والريفية في المكسيك. توفر هذه الدراسات فهما عميقا للعناصر الوبائية التي تفضي إلى استمرار طفيليات في النظم الإيكولوجية المختلفة ، مما يساهم في إجراء تقييم شامل للتأثير الحيواني المنشأ لبعض أنواع الطفيليات.

يمكن العثور على مراحل دورة حياة الطفيليات المعوية ، مثل البيض أو الخراجات أو البويضات أو اليرقات في عينات البراز. وبالتالي ، فإن فحص المواد البرازية يوفر معلومات قيمة حول طفيليات. أدت الحاجة إلى طريقة للكشف عن بيض Ancylostomidae في البراز البشري إلى استخدام مسحة البراز البسيطة في عام 1878 ، والتي كانت تستخدم لسنوات عديدة للكشف عن الطفيليات المعدية المعوية ولكنها اعتبرت غير حساسة للغاية. وهكذا ، نشأت الحاجة إلى تطوير طرق مجهرية أفضل¹⁴. لقد مر أكثر من 100 عام منذ أن تم وصف تقنية التعويم لاستعادة وعد بيض الطفيليات في عينات البراز لأول مرة¹⁵. منذ ذلك الحين ، تم اعتبار العديد من الطرق والمتغيرات لتقنية التعويم معيارا للكشف عن بعض الطفيليات في مضيفيها.

على سبيل المثال ، وصف لين طريقة في عام 1924 تتضمن تقنية التعويم بالطرد المركزي المباشر ، والتي تدمج الطرد المركزي متبوعا بتعويم الرواسب في محلول كلوريد الصوديوم المشبع مع SpG 1.2 في 1 جم (Lane) أو 10 g (تعديل Stoll). تم تعديل تقنية التعويم لاحقا باستخدام محاليل ذات SPG¹⁴ مختلفة. في عام 1939 ، أبلغ جوردون وويتلوك عن عيوب تقنية ستول بسبب التداخل من المخلفات في تصور بيض الطفيليات وطوروا الطريقة الكمية المعروفة باسم McMaster¹⁶. في عام 1979 ، أثبت O’Grady و Slocombe أن الثقل النوعي للمحلول والتوقيت وأحجام الشبكات للمصافي تؤثر على دقة اكتشاف البيض باستخدام تقنية التعويم¹⁷. خلال العقود الماضية ، نظرا لإجراء العديد من التعديلات على تقنية التعويم ، هناك حاجة ملحة لتوحيد طرق التعويم. حاليا ، مطلوب الكشف عن عدوى الديدان الطفيلية للكلاب في سياق الوقاية من الطفيليات الحيوانية المنشأ لتطبيق العلاجات المناسبة للديدان للحد من التلوث البيئي بالمراحل المعدية من الديدان الخيطية الحيوانية المنشأ¹⁸.

من بين الطرق النوعية ، يتم استخدام تقنية تعويم البراز على نطاق واسع ومقبولة لأنها لا تتطلب الكثير من المعدات ، وهي بسيطة وغير مكلفة وقابلة للتكرار. ومع ذلك ، فإن لها عيبا كبيرا في أنها تفتقر إلى الحساسية عندما تكون شدة العدوى منخفضة¹⁹. عادة ما يتم تحديد القدرة على الكشف عن وجود عدد أكبر من العناصر الطفيلية مثل البيض أو البويضات أو الخراجات أو يرقات الديدان الخيطية من خلال كثافة المحلول²⁰.

قارنت التقارير السابقة التقنيات الطفيلية المشتركة للكشف عن بيض الديدان الخيطية للكلاب. فيما يتعلق بالكشف عن البروتوزوا المتحركة ، يتم استخدام مسحات البراز المباشرة. في حين أن طرق الترسيب مفيدة لتشخيص البيض الثقيل من الطفيليات مثل الديدان المثقوبة²¹. واحدة من الاختبارات التشخيصية الميدانية الأكثر استخداما هي طريقة لطاخة البراز. ومع ذلك ، يمكن أن يعزى انخفاض مستوى حساسية هذه التقنية إلى حقيقة أنها تحتوي على حطام يتداخل مع اكتشاف بيض الطفيليات. من خلال دمج خطوة الغربلة جنبا إلى جنب مع الحلول التي توفر SpG المناسب ، توفر طريقة التعويم ملاحظة أكثر وضوحا وأقل تشوشا لبيض السكاريد والدودة الشصية. هذا يؤدي إلى عملية أكثر دقة وكفاءة للفحص المجهري²². وبالمثل ، يتم استخدام تقنيات التعويم البسيطة والطرد المركزي المباشر بشكل شائع لاستعادة بيض الطفيليات والبويضات¹⁴. يمكن اعتبار طرق التعويم الكلاسيكية نوعية أو كمية اعتمادا على استخدام غرفة العد مثل طريقة McMaster¹⁵. ومع ذلك ، نظرا لأن تقنية التعويم لها حساسية منخفضة وتركز على اكتشاف الطفيليات في فترة البراءة ، فلا ينبغي اعتبار النتائج السلبية حاسمة. ومع ذلك ، فإن الدقة لا تعتمد فقط على إجراء حفظ عينات البراز أو SpG لحلول التعويم ولكنها تعتمد أيضا على الكفاءة الفنية والخبرة في إجراء فحوصات البراز للمستخدم.

وبالتالي ، تم استكشاف طرق أخرى للكشف عن طفيليات في البراز. من المسلم به عموما أن أحد أكثر الأساليب استخداما لتشخيص عدوى الديدان المعوية في هو تقنية FLOTAC ، وهي طريقة متعددة التكافؤ وحساسة ودقيقة تعطي نتائج دقيقة وموثوقة لتشخيص A. caninum في عند مقارنتها ببروتوكول التعويم في أنبوب وتقنية McMaster^{19 ، 23}. تعد طرق الترسيب مفيدة لاستعادة بيض الصدفة وبيض النيماتودا الجنينية ومعظم بيض الدودة الشريطية ، والتي لا يمكن استعادتها على سطح محلول التعويم لأن هذه الهياكل لا تطفو²⁴. إحدى الطرق التي ثبت أنها متفوقة على تقنيات التعويم / الترسيب هي طريقة التعويم بالطرد المركزي المزدوج المعدل ، لأنها تمكن من اكتشاف بيض العصيدة في البراز ، وهي أقل استهلاكا للوقت ، وتفصل بيض Anoplocephala عن حطام البراز ، وتقلل من التبلور²⁵. علاوة على ذلك ، تم استخدام هذه التقنية بنجاح للكشف عن بيض الإسكاريد بحساسية عالية²⁶. ومع ذلك ، فإن بعض هذه التقنيات المذكورة أعلاه وطرق الطرد المركزي مثل Ovassay ، على عكس بروتوكول التعويم الذي نقترحه في هذه الدراسة ، تتطلب حفظ العينات في الكواشف مثل الفورمالين ، والمجموعات التجارية ، ومعالجة العينات في ظل ظروف المختبر ، واستخدام الكواشف مثل كبريتات الزنك²⁷ وهي مكلفة وتتطلب إجراءات خاصة للتخلص لتجنب السمية البيئية.

تم تفضيل استخدام التقنيات التي تزيد من حساسية طريقة التعويم عن طريق إضافة حلول ذات SPG عالية مؤخرا. ومع ذلك ، يجب اعتبار أن عيب هذه الحلول هو زيادة الحطام في التحضير النهائي وبالتالي الكشف غير الدقيق عن بيض الطفيليات. بالإضافة إلى ذلك ، فإن التوافر التجاري للمواد والكواشف والتكلفة وقضايا التأثير البيئي وصعوبة استخدام طرق الطرد المركزي تؤثر على اختيار تقنية التعويم¹⁴ ، والتي يمكن أن تكون صعبة في الظروف الميدانية على عكس البروتوكول الذي نقدمه في هذا العمل. يعد تحضير محاليل التعويم بملح الطعام مفيدا على استخدام السكر لأنه في ظل الظروف الحقلية ، يجذب السكر الحشرات مثل الدبابير والنحل وتصبح المستحضرات لزجة. علاوة على ذلك ، فإن المحاليل مثل الفينول ، الذي يضاف إلى محاليل السكر لتجنب الالتصاق ، أو ZnSO₄معقدة للتخلص منها بشكل صحيح وفقا لإرشادات حماية البيئة ولا يمكن التخلص منها في الحقل ؛ على عكس محلول ملح الطعام.

الهدف من هذه المخطوطة هو توضيح خطوات الكشف عن بيض T. canis و Ancylostoma spp. في عينات البراز باستخدام تكييف تقنية التعويم البسيطة في ظل الظروف الحقلية والمعملية. باتباع البروتوكول الموصوف هنا وباستخدام مجهر مزود ببطارية احتياطية ، يمكن تشخيص هذه الطفيليات الحيوانية المصدر للكلاب في المناطق الريفية والضواحي عندما لا تتوفر معدات مختبرية وبنية تحتية. يمكن أن توفر طريقة التعويم البسيطة الموصوفة في هذا العمل نتائج سريعة وهي تقنية غير جراحية وفعالة من حيث التكلفة للفحص الروتيني.