이 문서는 마우스에서 수평 해마 뇌 조각을 얻기 위해 체계적인 프로토콜을 설명하는 것을 목표로합니다. 이 방법론의 목적은 천공 경로 및 이끼 섬유장과 같은 해마 섬유 경로의 무결성을 보존하여 규톨염 자이러스 관련 신경학적 과정을 평가하는 것입니다.
해마는 변반 시스템의 일부이며 알츠하이머 병과 간질을 포함한 심각한 뇌 질환의 증상뿐만 아니라 기억 형성 및 통합에 관여하는 뇌의 고도로 조직 된 구조입니다. 해마는 높은 수준의 인트라 및 상호 연결을 받아 내부 및 외부 뇌 구조와의 적절한 의사 소통을 확보합니다. 이러한 연결은 섬유 경로의 형태로 서로 다른 정보 흐름을 통해 수행됩니다. 뇌 조각은 해마의 신경 생리적 기능을 탐구 할 때 자주 사용되는 방법론입니다. 해마 뇌 슬라이스는 전기 생리학적 기록, 가벼운 현미경 측정뿐만 아니라 여러 분자 생물학적 및 조직화학 적 기술을 포함한 여러 가지 응용 분야에 사용할 수 있습니다. 따라서, 두뇌 조각은 단백질 기능을 평가하기 위하여 이상적인 모형 시스템을 나타냅니다, 신경 장애에 관련된 병리학적인 프로세스를 조사하기 위하여 뿐만 아니라 약 발견 목적을 위해.
슬라이스 준비의 여러 가지 방법이 존재한다. 진동으로 뇌 슬라이스 제제는 조직 구조를 더 잘 보존하고 슬라이스 중에 충분한 산소 공급을 보장하며, 이는 조직 헬기의 전통적인 사용에 비해 이점을 제공합니다. 또한, 다른 절단 평면은 진동 뇌 슬라이스 준비를 위해 적용 될 수있다. 여기서, 마우스 두뇌의 진동 절단 수평 해마 조각의 성공적인 준비를 위한 상세한 프로토콜이 제공됩니다. 다른 슬라이스 제제와는 달리, 수평 슬라이스는 내경-해마 상호 작용의 조사를 용이하게 하는 슬라이스 내의 완전히 그대로 상태로 해마 입력 경로(천포성 경로)의 섬유를 유지할 수 있게 합니다. 여기에서, 우리는 murine 두뇌의 해부, 추출 및 급성 수평 슬라이스를 위한 철저한 프로토콜을 제공하고, 이 기술의 도전 그리고 잠재적인 함정에 대해 토론합니다. 마지막으로, 우리는 추가 응용 프로그램에서 뇌 슬라이스의 사용에 대한 몇 가지 예를 보여줍니다.
해마의 광범위한 탐구는 스코빌과 밀너가 심한 간질1에대한 치료로 해마와 인근 측두엽 구조의 외과 제거 후 새로운 선언적 기억을 형성하기 위해 환자 (H.M.)의 무능력을보고 했을 때 시작되었다. 그 순간부터 해마는 일반 뉴런 특성에서 부터 간질 및 알츠하이머 병2,3,4,5와같은 심각한 뇌 질환의 발달까지 광범위하게 연구되고있다. 해마는 감정과 기억 형성에 관여하는 관련 뇌 구조의 그룹으로 구성된 변연 시스템의 일부입니다6,7. 여러 섬유 통로의 조밀한 네트워크는 내부 및 외부 뇌 구조에 대한 엄격한 해마 연결을 달성합니다. 이러한 경로는 내측 및 측면 천포성 경로(내측 및 측면 천포성 경로(내측 성 피질- CA3 – CA1 및 subiculum)8,이끼 섬유 경로(DENtate gyrus to CA3)9 및 샤퍼 담보/협회 공동 통로(CA3 에서 CA1)10(도 1)을포함한다. 해마는 뉴런 층 형성의 매우 보존 된 라미나르 조직, 그리고 상대적으로 쉽게 중요한 신경 문화와 뇌 조각을 얻을 수있는 가능성5때문에 지금까지 가장 광범위하게 탐구 뇌 영역 중 하나를 제공합니다.
그림 1: 다양한 해마 영역과 주요 섬유 경로를 보여주는 만화. 다른 해마 영역은 고체 색선으로 표시됩니다 : 내측 피질 (EC; 블랙), 덴테이트 자이러스 (DG; 오렌지), 코르누 암모니스 (CA) 3 (시안), 2 (노란색), 1 (마젠타), 및 체질 (녹색). 섬유 통로는 유색 점선으로 표시됩니다: 내측(MPP, 적색) 및 측면 천공경로(LPP, 파란색) (내톨리날 피질에서 덴테이트 자이러스, CA3, CA1 및 체큐럼까지), 이끼 섬유 통로(MF, 바이올렛) (덴테이트 자이러스에서 CA3까지) 및 샤퍼 담보(SC, 브라운) (CA3에서 CA1까지)/협회 쉼표 경로(AC, KR1). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
두뇌 슬라이스 프로토콜은 종종 관심의 영역에 더 먼 뇌 영역에서 연결의 손실을 초래5. 더욱이, 모세혈관은 더 이상 기능성5이고 혈액 순환은11을박탈한다. 이러한 제한에도 불구 하 고, 두뇌 조각 여전히 주로 다양 한 장점으로 인해 해 마의 신경 생리 기능의 조사에 사용 됩니다. 첫째, 해마의 추출은 빠르며많은 물질이 필요하지 않습니다. 유일한 필수 기기는 해부 키트, 실험실 수조, 카보겐에 대한 액세스 및 진동 마이크로 토메 (진동)13을포함한다. 뇌 슬라이스 기술의 다른 자산은 실험시작 전내인성 방출 분자의 혈액-뇌 장벽(BBB)과 내인성 방출 분자의 세척이 5로, 비교적 정밀한 투여량조절(14)을가진 약물의 효과를 연구할 수 있게 한다. 더욱이, 뇌슬라이스는 해마15,16내의 사이토-아키텍처 및 시냅스 회로를 보존하며, 여기서 신경 해부학및 신경발달과 복잡한 뉴런-glia 상호작용이 있는 지역 환경은4,11,17로보존된다. 또한, 해마 섬유 연결은 주로 단방향및 해마 뉴런이 높은 시냅스 가소성을 가지며, 이는 신경학적 과정을 이해하기 위해 고품질 전기 생리학적 기록의 수집 및 해석을 엄청나게 단순화한다18,19. 중요한 것은, 뇌 슬라이스는 이미징 기록을 통해 분자 생물학적 기술에서 부터 전기 생리학적 측정12,20,21,22,23,24,25,26까지다양한 과학 기술에 적용할 수 있는 귀중한 자산을 제시한다.
위에서 설명한 바와 같이, 해마 뇌 슬라이스는 시냅스 연결의 구조적 및 기능적 특징을 연구하는 강력한 실험 도구를 제시합니다. 이것은 신경 흥분성 및 가소성에 화학 제품 또는 돌연변이의 효력을 평가할 기회를 제공합니다16.
급성 뇌 슬라이스 제제는 상대적으로 민감한 기술을 제시하고 최적의 슬라이스 품질은 동물의 나이, 안락사 방법, 해부 및 슬라이스의 속도, 슬라이스 솔루션 및 파라미터 (예를 들어, 슬라이스 속도)뿐만 아니라 슬라이스복구4를위한조건을 포함하여 이상적인 실험 조건에 크게 의존한다. 따라서 잘 설계된 프로토콜은 매우 중요하며 다른 연구단위(13)에걸쳐 재현성을 확보합니다.
여기서, 우리는 해마 측면 및 내측 천공 경로 및 이끼 섬유 통로의 무결성을 보존하기 위한 목적으로 급성 수평 해마 슬라이스 제제에 대한 상세한 프로토콜을 제공하여, 덴테이트 자이루스 관련 과정의 조사를허용하고 있다 9. 우리는 미세하게 해부, 추출 및 수평으로 뮤린 뇌를 슬라이스하는 주요 단계를 설명합니다, 칼슘 – 미세 불플루오리 메트릭 기록 및 필드 흥분 포스트 naptic 잠재적 기록의 대표적인 결과 다음 (fEPSP) 기준 조건하에서 및 야생 유형 C57BL / 6J 마우스의 뇌 조각에 LTP 유도 프로토콜 동안.
신경 과학 지역 사회 중 일반적으로 사용 되 고 있지만, 두뇌 슬라이스 준비는 또한 몇 가지 단점에 직면. 예를 들어, 관심 있는 뇌 영역에 대한 입력 및 출력 연결은 더 이상 뇌 슬라이스에 연결되지 않습니다. 더욱이, 일단 고립되면, 조직은 시간이 지남에 따라 천천히 저하하기 시작하고이 과정은 뇌 슬라이스의 생리적 상태를 변경할 수 있습니다. 특히 이 주제는 대부분의 뇌 슬라이스 기록이 몇 분에서 몇 시간까지 걸리기 때문에 매우 우려되며, 이는 실험 시작 전에 6-8 h까지 격리 된 조직에서 수행 된 기록으로 긴 실험 일을 초래합니다. 또한, 뇌척수액과 혈액 순환은 슬라이스 준비 중에 중단되어 뇌 슬라이스 내의 중요한 내인성 화합물이 부족할 수 있습니다. 그리고 가장 명백하게, 슬라이스 절차 자체는 얻은 결과를 손상시킬 수 있는 기계적인 조직 손상을 일으키는 원인이 될 수 있습니다. 그러나, 뇌 슬라이스 준비의 실제 혜택은 여전히 그들의 단점을 능가, 그래서 그들은 높은 평가 및 신경 과학 연구에 사용 하는 기술을 제시.
급성 해마 뇌 슬라이스는 분자 수준에서 복잡한 뇌 회로 연구에 이르기까지 신경 과정을 조사하는 강력하고 널리 사용되는 기술을 제시합니다. 이것은 쉽게 슬라이스 준비에 보존 할 수있는 해마의 이상적인 신경해부학을 기반으로18. 따라서 해마 뇌 슬라이스는 약물 검진17,인지 기능40, 41,병리학적 뇌 질환 에 대한 조사(14,42,43)등 다양한 과학 연구 프로젝트에 사용된다. 그러나 다양한 응용 분야의 광범위한 응용 분야는 해부 조건 및 절단 평면 방향과 같은 다양한 매개 변수에서 다를 수 있는 광범위한 사용 가능한 슬라이스 준비 프로토콜을 발생시킵니다. 따라서 적절한 슬라이스 준비 프로토콜을 선택하려면 과학 프로젝트의 정확한 연구 문제를 결정해야 합니다.
티슈 헬기는 해마 뇌 슬라이스44,45를준비하기 위해 가장 오래된 사용 기술 중 하나를 제시한다. 이 준비 방법의 주요 장점은 헬기의 저렴한 비용과 빠르고 쉬운 사용(46)을포함한다. 그러나, 조직 헬기는 형태학적 변경 및 세포 사멸을 초래하는 기계적 스트레스를유발한다(47). 이에 비해 진동은 다소 비싼 기계이며 슬라이스 준비 시간이 크게 증가하여 슬라이스의 품질에 영향을 미칠 수 있습니다. 그러나, 진동은 일반적으로 조직에서 조각을 분리하는 보다 부드러운 방법을 제공하고 뇌를 전체 격리 절차를 통해 멋지게 냉각및 산소화하여 슬라이스특성(46)을개선할 수 있게 한다. 따라서, 몇몇 그룹은 표준적으로 이 기술을 채택하고 진동기16,30,48을사용하여 급성 해마 뇌 슬라이스의 제조를 위한프로토콜을앞으로 가져왔다. 일부 프로토콜은 슬라이스 자체에 대한 몇 가지 세부 사항만 제공하지만 오히려 이러한 슬라이스 준비(48)의특정 응용 프로그램에 초점을 맞추고 있지만, 다른 프로토콜은 절단 평면 또는 기타 프로토콜 세부 사항 (예 : 아가로즈 포함 또는 슬라이스 / 복구 솔루션)에서 다른 상세한 슬라이스 프로토콜을 제공합니다27,30.
여기에 설명된 프로토콜은 젊은 동물로부터 고품질급성 수평 해마 마우스 뇌 조각을 준비하기 위한 간단한 방법을 제시한다. 이 프로토콜은 내측 피질에서 해마8,49,50으로진행되는 해마 입력 경로를 제시하는 천공 경로(내측 및 측면)를 보존하는 데 특히 유용하다. 궁수, 관상, 뿐만 아니라 고립 된 해마 가로 슬라이스 준비 제대로 천공 경로를 보존하지 않습니다, 이는 주로 층 II와 내측 피질의 V에서 유래 하 고 해마 내에서 여러 영역에 프로젝트18. 해마와 관련하여 내토경 피질의 해부학적 위치로 인해, 수평 뇌 슬라이스는 슬라이스제제(31)내에서 완전히 그대로 천포성 경로 섬유를 유지하기 위해 필수적이다. 또한, 수평 슬라이스는 이상적으로 해마9,30,50내에서 CA3 뉴런에 dentate gyrus에서 프로젝트 이끼 섬유를 보존한다. 따라서, 이러한 제제 방법은 해마 입력 경로 및 DG 관련 공정을 조사하는 연구를 위한 높은 가치이다. 또한,이 프로토콜은 쉐퍼 담보 경로(50)의조사를 허용한다. 그러나, 궁수 및 관상 동맥 두뇌 슬라이스 준비는 CA3에서 CA1 섬유 투영을 조사할 때 더 일반적으로 사용됩니다, 아마도 고품질 의 조각을 얻기의 기회를 증가시킬 수 있는 그들의 약간 더 빠른 준비 시간 때문일 수 있기 때문에. 그럼에도 불구하고, 수평 해마 슬라이스 준비는 하나의 슬라이스 반구 내의 모든 해마 섬유 경로의 보존 및 조사를 허용하기 때문에 강력한 연구 도구를 제시한다. 이는 회로 응답이 여러 전극 분석 기록과 같이 연구될 때 특히 유용할 수 있습니다.
뇌 조각을 준비할 때 주요 관심사는 뇌 조직의 적절한 보존입니다. 이는 빠른 해부, 조직의 연속및 충분한 산소화 및 냉각, 저나트륨, 고자당 슬라이스 용액39,51을이용한 보호 절단 방법을 사용하여 뇌 조직의 보호를 포함한 우리의 프로토콜에서 몇 가지 중요한 단계에 의해 달성된다. 여기에 설명된 프로토콜이 약 90%의 성공률을 산출한다는 사실에도 불구하고, 나이가 많거나 유전적으로 다양한 동물에서 파생된 조직으로 작업하거나 특정 세포 인구를 보존하려고 할 때 잠재적으로 추가적인 보호 단계가 필요할 수 있습니다. 몇몇 방법은 이미 민감한 두뇌 조직 준비를 보호하기 위하여 보고되었습니다. 이러한 방법은 나트륨투과(52)를줄이기 위한 NMDG 기반 슬라이싱 용액의 사용, NMDA 수용체활성(53)을차단하기 위해 슬라이싱 용액에서 높은 마그네슘 수준을 사용하고, 또한 복구 기간 동안 보호 용액의 장기간 사용(23)을 포함한다. 이러한 모든 조치는 감소 된 흥분 독성을 초래할 것이다. 또한, 얼음 차가운 보호 ACSF 솔루션과 트랜스 카다이얼 관류는 종종 사용 되 고 오래 된 동물과 함께 작업 하는 경우 필요(27)
급성 해마 뇌 슬라이스는 상대적으로 두꺼운 (300-500 μm) 급성 뇌 슬라이스로부터 얻을 수있는 높은 진폭 신호와 같은 이유로 전기 생리학적 연구에 이상적으로 적합하고 광범위하게 사용되며, 이는 높은 신호 대 잡음비(11)를보장한다. 표준화적으로 사용되는 전기 생리학적 응용 분야는 전압 또는 전류 클램프 모드에서 세포외 필드 기록 및 세포 내 전세포 기록을 포함한다. 고품질 전기생리학적 데이터를 획득하기 위해 슬라이스 건강은 주요 관심사이며 제시된 프로토콜을 엄격하게 따르면 보장될 수 있다. 그러나 슬라이스 준비는 매우 민감한 기술을 제시하므로 각 실험이 시작되기 전에 품질 검사를 정기적으로 포함해야합니다. 여러 매개 변수는 슬라이스의 품질 검사로 사용할 수 있으며 입력 출력 곡선 및 기준선 fEPSP 또는 EPSC레코딩(19)을통해 표준적으로 평가된다. 그럼에도 불구하고, 최적 이하의 전기생리학적 특성은 전극 위치, 방향 또는 손상과 같은 실험적 오류에서 발생할 수 있으며 준비된 슬라이스의 건강만을 나타내지 않는다는 점에 유의해야 한다. 따라서, 40배 목표 또는 DAPI 핵 염색하에서 세포의 간단한 시각화 및 평가와 같은 추가 품질 제어를 수행하는 것이 바람직하다. 이러한 품질 검사는 여러 슬라이스 준비 세션을 통해 일정한 슬라이스 상태를 확인하는 데 사용할 수 있습니다.
칼슘 미세 불피성은 해마 뇌 슬라이스를 연구하는 데 덜 일반적으로 사용되는 기술을 제시합니다. 그러나, 이 기술은 표준 세포외 및 세포내 전극 기록에 추가적인 가치입니다, 그것은 신경 및 시냅스 신호에서 높은 중요성인 세포내 칼슘 플럭스를 시각화하고 정량화할 수 있기 때문에. 세포내 칼슘 농도의 변화는 신경 전달 물질 소포 방출, 포스트 냅틱 잠재적 인 생성, 시냅스 가소성 및 축삭 신경전도의 조절에 관여54,55,56. 이 기술의 그림으로(그림 4),우리는 시판되는 칼슘 염료를 사용했습니다. 틀림없이, 칼슘 염료를 가진 조직 조각의 처리는 더 낮은 위치신경 세포의 증가된 실험 시간 프레임 및 비효율적인 적재와 같은 어려움을 산출할 수 있습니다. 그러나 이 기술의 변형은 이러한 기술적 과제를 회피하는 데 사용될 수 있습니다. 예를 들어, 해마 슬라이스에 칼슘 측정 및 패치 클램프 레코딩을 결합할 수 있습니다. 이러한 방식으로, 칼슘 형광염은 패치 파이펫을 통해 특정 세포에 적재될 수 있어, 관심 있는 한 특정 셀에서 칼슘 역학의 측정을허용(57). 대안적으로, 칼슘 표시기를 표현하는 유전자 조작 동물, GCaMP58,전체 두뇌에서, 또는 세포 특정 promotor에 의해 구동되는, 이용될 수 있었습니다. 흥미롭게도, 관심있는 단백질에 직접 링커를 가진 GCaMP 동물에서 뇌 조직은 신경 발현 패턴을 결정하거나 칼슘 불꽃과 파도에 관여를 조사 할 수있는 기회를 제공 할 수 있습니다.
전부, 우리는 전기 생리및 화상 진찰 기록을 위한 마우스에서 건강하고 실행 가능한 수평 해마 두뇌 조각의 성공적인 준비를 위한 지침을 제공합니다. 이 방법론은 dentate gyrus에 기술된 두뇌 병리에서 생기는 신경학상 변경에 접근하는 것은 아주 유용합니다.
The authors have nothing to disclose.
연구 시설의 사용에 대해 Keimpe Wierda 박사와 조리스 드 위트 박사의 감독하에 VIB-KU 루벤 뇌 질환 연구 센터의 전기 생리학 단위에 감사드립니다. 또한, 우리는 이온 채널 연구의 실험실과 ENdometrium의 연구소의 모든 구성원에게 감사, 자궁 내막증과 그들의 유용한 토론과 의견에 대한 KU 루벤에서 생식 의학.
이 프로젝트는 연구 재단-플랑드르(G.084515N 및 G.0B1819N에서 J.V.)와 KU 루벤 연구위원회(C1-자금 C14/18/106~J.V.)로부터 자금을 지원받았습니다. K.P.는 FWO [PEGASUS]2 마리 Skłodowska-Curie 펠로우이며 연구 재단 플랑드르 (FWO)(12T0317N)와 마리 스크와도우스카 – 퀴리 보조금 계약 (665501)에 따라 유럽 연합의 호라이즌 2020 연구 및 혁신 프로그램에서 자금을 받았습니다. K.H.는 벨기에 플랑드르 연구 재단(12U7918N)의 박사 후 펠로우입니다.
Anesthesia chamber | home made – Generic | N/A | plexiglas |
Anesthesia vaporizer | Dräger & MSS International Ltd | Isoflurane Vapor 19.3 & MSS Isoflurane | to vaporize isoflurane for rodent anesthetization |
Barrels for the perfusion system | TERUMO | Hypodermic syringes without needle | https://www.terumotmp.com/products/hypodermics/terumo-hypodermic-syringes-without-needle.html |
Bicuculline methiodide | hellobio | HB0893 | https://www.hellobio.com/bicuculline-methiodide.html |
Borosilcate glass capillaries | Science Products | GB150F-8P | https://science-products.com/en/shop/micropipette-fabrication-1/capillary-glass-for-micropipette-pullers/borosilicate-glass-capillaries/borosilicate-filament-polished |
Calcium chlorid dihydrate | Merck | 102382 | https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Calcium-chloride-dihydrate,MDA_CHEM-102382?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F |
Calcium Imaging software | Till Photonics | LiveAcquisition v2.3.0.18 | |
Carbogen tank | Air Liquide | Alphagaz mix B50 | Gasmixture CO2/O2: 5/95, purity 5 |
Cluster microelectrode | FHC | CE2C55 | https://www.fh-co.com/product/cluster-microelectrodes/ |
Culture dish (35 mm) | Corning Life Sciences | 353001 | https://ecatalog.corning.com/life-sciences/b2c/US/en/Cell-Culture/Cell-Culture-Vessels/Dishes%2C-Culture/Falcon®-Cell-Culture-Dishes/p/353001 |
Culture dish (90 mm) | Thermo Fisher Scientific | 101VR20 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/101R20#/101R20 |
Curved forceps | Fine Science tools | 11270-20 | https://www.finescience.de/de-DE/Products/Forceps-Hemostats/Dumont-Forceps/Dumont-7b-Forceps/11270-20 |
D-AP5 | hellobio | HB0225 | https://www.hellobio.com/dap5.html |
D-(+)-Glucose monohydrate | Sigma Aldrich | 16301 | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/16301?lang=en®ion=BE |
Digital CMOS camera | HAMAMATSU | ORCA-spark C11440-36U | https://www.hamamatsu.com/eu/en/product/type/C11440-36U/index.html |
Dissection scissors | Fine Science tools | 14058-09 | https://www.finescience.de/de-DE/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-ToughCut®/14058-09 |
DNQX | hellobio | HB0262 | https://www.hellobio.com/dnqx-disodium-salt.html |
EMCCD camera | Andor | iXon TM + DU-897E-CSO-#BV | https://andor.oxinst.com/products/ixon-emccd-cameras?gclid=CjwKCAjw97P5BRBQEiwAGflV6ULsKjXfhN2YZxtvsWAmF4QghyXZKuqYHVMa6KU9JyS80ATQkSKeBBoCIM0QAvD_BwE |
EPC10 USB Double Patch Clamp Amplifier | HEKA Elektronik | 895278 | https://www.heka.com/sales/brochures_down/bro_epc10usb.pdf |
Filter paper | VWR | 516-0818 | grade 413 |
Fine brush | Raphael Kaerell | 8204 | Size #1 |
18G needle | Henke Sass Wolf Fine-Ject | 18G X 1 1/2" 4710012040 | https://www.henkesasswolf.de/cms/de/veterinaer_produkte/produkte_vet/einmalkanuelen/hsw_henke_ject_einmalkanuelen/ |
Isoflurane | Dechra Veterinary Products | Iso-Vet 1000mg/g | 250 ml bottle |
Loctite 406 | Henkel Adhesive technologies | Loctite 406 | Super glue |
Magnesium sulfate heptahydrate | Merck | 105886 | https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Magnesium-sulfate-heptahydrate,MDA_CHEM-105886?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F |
Micromanipulator | Luigs & Neumann | SM-10 with SM-7 remote control system | https://www.luigs-neumann.org |
Microscope (for calcium imaging) | Olympus | BX51WI | https://www.olympus-lifescience.com/de/microscopes/upright/bx61wi/ |
Microscope (for ephys recordings) | Zeiss | Axio Examiner.A1 | https://www.micro-shop.zeiss.com/de/de/system/axio+examiner-axio+examiner.a1-aufrechte+mikroskope/10185/ |
Microscope light source | CAIRN Research | dual OptoLed power supply | https://www.cairn-research.co.uk/product/optoled/ |
Monochromator | Till Photonics | Polychrome V | |
N-Methyl-D-aspartic acid (NMDA) | Sigma Aldrich | M3262 | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m3262?lang=en®ion=BE |
Oregon Green® 488 BAPTA-1 | Invitrogen Molecular Probes | #06807 | 10x50ug |
Osmometer | Wescor | 5500 vapor pressure osmometer | to verify osmolarity of salt solutions |
Peristaltic pump | Thermo Fisher Scientific | Masterflex C/L 77120-62 | https://www.fishersci.be/shop/products/masterflex-peristaltic-c-l-dual-channel-pump-2/p-8004229 |
pH meter | WTW | inoLab series pH 720 | https://www.geminibv.nl/wp-content/uploads/manuals/wtw-720-ph-meter/wtw-inolab-ph-720-manual-eng.pdf |
Pipette puller | Sutter Instrument | P-1000 | https://www.sutter.com/MICROPIPETTE/p-1000.html |
Potassium chlorid | Chem-lab | CL00.1133 | https://www.chem-lab.be/#/en-gb/prod/1393528 |
Potassium dihydrogen phosphate | Merck | 104873 | https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Potassium-dihydrogen-phosphate,MDA_CHEM-104873?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F |
Razor blade to prepare hemispheres | SPI supplies | Safety Cartridge Dispenser – Pkg/10 | GEM Scientific Single Edge Razor Blades |
Razor blade for vibratome | Ted Pella Inc | 121-6 | double edge breakable style razor blades (PTFE-coated stainless steel) |
Recovery chamber | home made – Generic | N/A | to collect and store brain slices in (see details in manuscript) |
Scissors | Any company | N/A | Blade should be well sharpened and at least 15 cm long for easy decapitation |
Silver electrode wire | Any company | for recording and reference electrodes | |
Sodium dihydrogen phosphate dihydrate | Merck | 106342 | https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Sodium-dihydrogen-phosphate-dihydrate,MDA_CHEM-106342?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F |
Sodium hydrogen carbonate | Alfa Aesar | 14707 | https://www.alfa.com/en/catalog/014707/ |
Sodium chlorid | Fisher Scientific | S/3160/60 | https://www.fishersci.co.uk/shop/products/sodium-chloride-certified-ar-analysis-meets-analytical-specification-ph-eur/10428420 |
Software for field recordings | HEKA Elektronik | PatchMaster | https://www.heka.com/downloads/software/manual/m_patchmaster.pdf |
Spatula | Sigma Aldrich | S9147-12EA | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s9147?lang=en®ion=BE |
Stimulator | A.M.P.I | ISO-FLEX | http://www.ampi.co.il/isoflex.html |
Sucrose | VWR International Ltd. | 102745C | https://es.vwr-cmd.com/ex/downloads/magazine/lupc_userguide_uk.pdf |
Tubing for carbogen, perfusion and suction lines 1 | Warner Instruments | 64-0167 | Tygon tubing (TY-50) for standard valve systems |
Tubing for carbogen, perfusion and suction lines 2 | Fisher Scientific | 800/100/200 & 800/100/280 | Smiths Medical Portex Fine Bore LDPE Tubing |
Vacuum pump | home made – Generic | N/A | |
8 valve multi-barrel perfusion system | home made | N/A | consists of barrels, tubing and a self-made automated valve control (specifications of all purchased parts can be found in this Table) |
Magnetic valves (to control the perfusion lines) | NResearch Inc. | p/n 161P011 | https://nresearch.com/ |
Vibratome | Leica | 14912000001 | Semi-automatic vibrating blade microomei VT1200 |
Water bath | Memmert | WNB 7 | https://www.memmert.be/wp-content/uploads/2019/09/Memmert-Waterbath-WNB-7.en_.pdf |
Water purification system | Merck | Synergy millipore | to obtain highly purified water |
12-well plates | Greiner Bio-One | CELLSTAR, 665180 | http://www.greinerbioone.com/UserFiles/File/Catalogue%202010_11/UK/3680_005-Kapitel1_UK.pdf |