의 유충과 pupae에 chordotonal 장기 immunostain하고 시각화하는 방법<em> Drosophila melanogaster</em>이 설명되어 있습니다.
Proprioception은 몸 안에서 발생하는 자극에 반응하여 신체 부위의 움직임이나 위치를 감지할 수있는 능력입니다. fruitflies와 다른 곤충에 proprioception는 chordotonal 기관 (ChOs) 2 되나 특별한 감각 기관에 의해 제공됩니다. Drosophila의 많은 다른 기관들과 마찬가지로 ChOs는 플라이의 수명주기 동안 두번 개발할 수 있습니다. 첫째, 애벌레 ChOs이 embryogenesis 동안 개발할 수 있습니다. 그런 다음, 성인 ChOs는 애벌레 imaginal 디스크에서 개발하고 변형하는 동안 차별화하는 데 계속해서 시작합니다.
embryogenesis 동안 애벌레 ChOs의 개발은 광범위하게 10,11,13,15,16 연구되었습니다. 각 조의 중심은 신경 세포와 scolopale 세포들로 구성된 감각 단위입니다. 감각 단위 1,9,14 전문 표피 부착 세포를 통해 표피에 연결 액세서리 세포의 두 종류 사이에 뻗어있다. 언제 파리 유충 이동, 전자의 상대 변위pidermal 첨부 전지는 감각 유닛과 dendrite 8,12의 바깥 부분에서 구체적인 일시적인 수용체 잠재적인 vanilloid (TRPV) 채널의 논리상 필연의 개통으로 스트레칭이 생깁니다. elicited 신호는 다음 중추 신경계에서 전위의 중앙 패턴 발생기 회로로 전송됩니다.
여러 ChOs은 성인 플라이 7에 설명되어있다. 이들은 성인 플라이 appendages (다리, 날개 halters)의 관절 부근과 흉부와 복부에 위치하고 있습니다. 또한, ChOs 여러 수백 총칭 기계 에너지 3,5,17,4에 해당 transduce의 음향 성인 안테나에 존스턴의 장기를 형성하고 있습니다.
배아 단계의 ChOs의 개발에 관한 광범위한 지식와는 달리, 거의가 애벌레 단계 동안 이들 장기의 형태에 대해 알려져 있습니다. 또한, 대퇴 ChOs의 예외 18 존스턴의 오르간과, 우리 knowled성인 파리의 ChOs의 개발과 구조에 대한 GE는 매우 단편적인 것입니다.
여기는 세번째 instar의 애벌레와 pupae의 ChOs를 더럽히는 것하고 시각화하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 더 나은 형태와 특징 및 플라이의 다양한 ChOs의 발전을 이해하는 유전자 도구를 함께 적용할 수 있습니다.
이 동영상에서 설명하는 프로토콜은 애벌레와 pupal 단계 동안 고유 ChOs을 시각화하는 방법을 제공한다. 고유 ChOs의 구조 및 개발에 관한 연구는 지금까지 주로 배아 단계와 애벌레 imaginal 디스크로 제한되었습니다. 따라서 애벌레와 어른 모두 ChOs 개발 후기 단계의 여러 측면은 크게 알려지지 않은 남아 있습니다. Drosophila에서 흔히 유전 도구와 결합하여 설명한 프로토콜은, 새로운 유전자 및 ChOs 개발의 후기 단계에서 역할을 경로를 파악하고 공부할 이용하실 수 있습니다. 이 프로토콜은 쵸의 시각화에 최적화되었지만, 그것은 그러한 pupal 날개 6 등 다른 조직의 염색법에 맞게 조정 할 수 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
저자는 우리에게 항체를 보내주셔서 아이오와 대학에서 발달 연구 하이 브리 도마 은행을 감사드립니다. 이 작품은 이스라엘 과학 재단으로부터 보조금 (제 29 / 08)에 의해 지원되었다. 로도 DFG (독일 Forschungsgemeinschaft)의 연구 기금에 의해 지원됩니다.
Name of the reagent/tool | Company | Catalogue number | Yorumlar |
Dumont #5 (or #55) forceps, biologie tip | F.S.T | 11252-20 or 11252-10 (or similar forceps) |
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Austerlitz stainless steel insect pins, minutiens 0.1mm | Roboz Surgical Instrument Co | RS-6083-10 | |
Sylgard 184 silicone elastomer kit | DOW Corning Corporation | 240.4019862 | |
Vannas micro scissors (straight, 7.5 cm, blade 3mm) | AS Mdeizintechnik GmbH | 11-590-00 | Vannas Spring Scissors with identical specifications can be purchased from Roboz Surgical Instrument Co. |
Orbital shaker – Rotamax-120 | Heidolph | N/A | |
Dako Fluorescent Mounting Medium | Dako Cytomation, Glostrup, Denmark | DK-5302392 | |
X10 PBS formulation | 2 gr/lit KCl, 2 gr/lit KH2PO4, 80 gr/lit NaCl, 21.7 gr/lit Na2HPO4.7H2O |
The quality of PBS is critical for the success of this protocol | |
PBT | X1 PBS + 0.1% Tween 20 |