我们已经开发出一种使用激光诱导超声检测循环黑色素瘤细胞的转移性疾病的早期指标的流式细胞仪。
循环肿瘤细胞(CTCS)是那些从宏观肿瘤分离,细胞通过血液和淋巴系统种子1,2,3继发性肿瘤蔓延。车辆检验中心是转移性疾病和他们的血液样本检测指标,可用于诊断癌症和监测病人的治疗反应。由于车辆检验中心是罕见的,对肿瘤细胞之间的正常血细胞的数十亿美元,在晚期癌症患者,他们的检测和枚举组成,是一项艰巨的任务。我们利用在大多数黑色素瘤细胞色素的存在,产生的光声,或激光诱导超声波在自定义流式细胞仪检测循环黑色素瘤细胞(CMCS )4,5。这个过程需要使用离心和取得的白血细胞层分离全血样本。如果目前在全血,由于类似密度的白血细胞的CMC将单独。这些细胞悬浮于磷酸盐缓冲液(PBS),并引入流量计。而不是一个连续流动血细胞悬液,诱导两相流为了捕捉这些细胞作进一步研究。在两相流中,在一个微流体系统中的两个互不相溶的液体在路口和蛞蝓液体6,7交替的形式满足。 PBS暂停依次用激光照射的白血细胞和空气形成微升蛞蝓。增加了液相的表面活性剂可以形成统一蛞蝓,用户可以通过改变两相的流速不同大小的蛞蝓。空气和白血细胞的PBS鼻涕虫的蛞蝓包含没有光吸收,因此,不产生光声波。然而,甚至包含单一的CMC的白血细胞,蛞蝓吸收激光和产生高频率的声波。这些蛞蝓产生的光声波,被隔离,并收集细胞化学染色为verificATION奇美通讯。
检测车辆检验中心仍然是极少数因难的问题隔离罕见的肿瘤细胞临床应用的研究密集型领域。许多其他技术正在评估的CTC检测,包括RT – PCR技术,微流体细胞捕捉,免疫捕获,和其他方法8-12。然而,CMC的显示光声检测的承诺,因为它是标签,并提供了一种快速,准确的手段捕捉小,重量轻的吸收颗粒。
协议描述白血细胞分离效率高,还存在样品中的红血细胞的低数量。这些胭脂污染的细胞也能吸收激光灯,但在一个水平大大下降。为了确保红血细胞不干扰我们的黑色素瘤的检测系统,通过该系统推出5个健康的病人样本,没有人给一个信号,表明,目前在足够低浓度的红血细胞被忽略。
使用培养的黑色素细胞和光声流系统已被证明敏感下降到1细胞/μL(未发表数据),已进行了一系列的集中研究。这些研究下去,并很快将包括使用癌症病人样本的审判。
这光声技术也正在评估中使用,如乳腺癌和附加外源性生色前列腺癌,非色素的CTC。我们已经完成前期工作,利用黄金纳米粒子癌症cells13。这些试验表明,纳米粒子可以提供必要的光吸收产生光声波。其余的技术挑战是癌细胞的选择性附加这样的粒子。
The authors have nothing to disclose.
我们认识到,生物工程和在密苏里大学的克里斯托弗邦德生命科学中心部的支持。我们承认,从密苏里生命科学研究委员会09-1034和国立卫生研究院R21CA139186 0赠款支持。我们也感谢在密苏里州,密苏里大学分子细胞学核心,和密苏里大学工程学院的财政支持大学生命科学学院本科生研究机会计划。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Yorumlar |
DMEM | Invitrogen | ABCD1234 |