我々は転移性疾患の早期指標として循環するメラノーマ細胞を検出するためにレーザー誘起超音波を用いてフローサイトメーターを開発しました。
循環腫瘍細胞(CTCの)は巨視的な腫瘍から分離し、種子の二次腫瘍1,2,3への血液やリンパ系を介して拡散しているそれらの細胞である。 CTCのは、転移性疾患の指標であると血液サンプル中のそれらの検出は、癌の診断と治療に対する患者の反応を監視するために使用されることがあります。 CTCのは稀なので、進行がん患者、それらの検出と列挙内の正常な血液細胞の十億の中の腫瘍細胞について、構成することは困難な作業です。我々は4,5メラノーマ細胞(CMCの)循環を検出するためのカスタムフローサイトメーターでの超音波を誘導音響生成する最もメラノーマ細胞における色 素の存在を利用する、またはレーザー。このプロセスは、遠心分離を使用し、白血球の層を得る全血検体を分離伴います。全血中に存在する場合、CMCは同じような密度のために白血球を分離します。これらの細胞を再懸濁するリン酸緩衝生理食塩水(PBS)と流量計に導入する。むしろ血液細胞懸濁液の連続的な流れよりも、我々は、さらなる研究のためにこれらの細胞を捕捉するために、二相流を誘導した。二相流では、マイクロ流体システムに2つの不混和液体は液体6,7のナメクジを交互に接合し、フォームに会う。 PBSは、順番にレーザー光を照射している白血球や空気のフォームマイクロリットルのナメクジを中断。液相に界面活性剤の添加は、均一なスラグ形成を可能にし、ユーザーは、2つのフェーズの流量を変化させることによって、異なるサイズのナメクジを作成することができます。白血球と空気とPBSのナメクジのナメクジは光吸収剤を含まず、従って、光音響波を生成しない。しかしながら、単一のCMCを含む白血球のナメクジは、レーザー光を吸収し、高い周波数の音波を生成する。光音響波を生成するこれらのナメクジはverificのために隔離し、細胞化学染色のために収集されますCMCを注意深く検討する必要があります。
CTCを検出することはまれな腫瘍細胞を単離するのが難しい問題があるため、非常に少数の臨床応用でも、研究集約的な分野です。他の多くの技術がRT – PCR、マイクロセルのキャプチャ、免疫キャプチャ、および他の方法8月12日を含めて、CTCの検出、のために評価されている。しかし、CMCのショーの光音響検出は、ラベルフリーで、小さな、光吸収粒子を捕捉するために迅速かつ正確な手段を提供するように約束。
白血球を分離するために記述されたプロトコルは、非常に効率的です、まだ赤血球の数値が低いほど、サンプルに存在している。これらルージュ混入細胞はまた、レーザー光を吸収するが、大幅に減少したレベル。赤血球は、当社の黒色腫の検出システムに干渉しないように、五健康な患者のサンプルは、システムを介して導入され、いずれも赤血球が十分に低い濃度で存在していることを示す、シグナルを明らかにしていない無視される。
濃度の一連の研究は、培養メラノーマ細胞を用いて行われていると光音響流のシステムがダウンして1セル/μL(未発表データ)に敏感な証明されています。これらの研究は継続にあり、すぐに癌の患者のサンプルを用いて試験が含まれます。
この光音響法はまた、外因性発色団を取り付けることで、乳癌や前立腺癌などの非色素CTCの、で使用するために評価されている。我々は癌cells13に金ナノ粒子を用いた予備作業を実行しました。これらのテストは、ナノ粒子は、光音響波を生成するために必要な光吸収を提供できることが示されている。残りの技術的課題は、選択的にがん細胞にこのような粒子を添付することです。
The authors have nothing to disclose.
我々は、生体工学およびミズーリ大学のクリストファーS.ボンド生命科学センターの省の支援を認める。私たちは、ミズーリ州のライフサイエンス研究会09〜1034とNIH R21CA139186 – 0からの助成金を認める。私たちは、ミズーリ大学、ミズーリ分子細胞学コアの大学、および財政的支援のための技術のミズーリ大学大学ライフサイエンス学部研究機会プログラムをも感謝。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Yorumlar |
DMEM | Invitrogen | ABCD1234 |