NanoART üretim 1. Islak freze NanoART NETZSCH MicroCer Yöntemleri Analitik bir denge kullanarak nanoformulations ve 10 mM HEPES tamponu, pH 7.8 T-18 Ultraturrax mikser kullanarak tamamen dağılana kadar karıştırın kullanılacak olan ilaç kristalleri ve çeşitli yüzey tartılır. % 2 – formülasyonu ilaç yüzde 1 arasında olmalıdır. Sürekli freze, soğutucu ve kompresör açık olduğundan emin olun. Değirmen numunenin başlamadan önce çıkış basıncı 100 PSI civarında olmalıdır. Kontrol ünitesi açma ve taşlama medya tank yüklü olması, böylece taşlama tankı döndürmek. Bir huni kullanarak taşlama odasına boncuk 50 ml ekleyin. Mekanik salmastra sızıntılarını önlemek için hiçbir boncuk taşlama odasının dışında konuları veya herhangi bir yerde olmadığından emin olun. O-ring freze odasının yerini olduğundan emin olun. Uygun bir ekran hasır boyutunu seçin ve uygun kapak montaj ve somunları sıkarak kapakları güvenli. Ekran mesh boyutu en az yarım boncuk boyutta olması gerekir. Ürünün sürekli öğütme sırasında filtrenin tıkanmasını önlemek için, büyük ekran örgü boyutu kullanın. Öğütme haznesi Alt odasının üstünde sağlanan düğmeyi kullanarak yatay ve emin olmak için toplama kabına ürün çıkış borusunun boşaltır. Ürün girişine yüzey çeşitli miktarlarda uyuşturucu süspansiyonu ekleyin. Süspansiyonun minimum hacim 100 mL olmalıdır. Bu aşırı ısınmasını önlemek ve Tambur parçalar üzerinde daha az aşınma nedeniyle boncuk kontaminasyonu önlemek Pompa kontrol ünitesi kullanarak başlayın. Akış hızı formülasyonu (~ 50 – 150 ml / dk) için gerekli olan çeşitli olabilir. Karıştırıcı açın ve kontrol ünitesi hızını ayarlayabilirsiniz. Bir MicroCer 620 rpm 4320 rpm hızı artırılabilir. Sıcaklık üst öğütme odasına bağlı ve herhangi bir aşırı ısınma olduğundan emin olun sıcaklık ölçer kullanarak izleyin. Çeşitli hızlarda ve akış hızlarında Mill örnek ve küçük boyutu ve şarj Kırınım Işık Saçılma Brookhaven Zetasizer (Tablo 1) kullanılarak ölçümler için formülasyonun alikotları (~ 1 ml). Istediğiniz boyutu elde edildikten sonra, kontrol ünitesi kullanılarak freze durdurun. Hala pompa ile örnek bir balona toplamak. Ilacın tamamen örnek toplama şişesi içine akmasını sağlayın. Pompa kapatın. Boncuklar kaldırmak için, ünitenin altına bir toplama kabı yerleştirin. Ön kapak montaj plakası üzerinde somunları ve boncuk tepsi toplamak. Ön plaka çıkartın ve tepsiye boncuk yıkamak için deiyonize su şişesi kullanın. 50 ml santrifüj tüpleri içine öğütülmüş süspansiyon transferi ve 10.000 rpm (10.174 RCF) 30 dakika boyunca santrifüj. Santrifüj döngüsünün tamamlanmasından sonra, süpernatant miktarını ölçmek ve aynı miktarda taze sürfaktan çözüm ile değiştirin. Tabanda tamamlandıktan sonra, freze odası ve 10 dakika için değirmen süspansiyon aktarın. Bir kısım (~ 1 ml) alın ve Zetasizer (Tablo 1) kullanarak tekrar numune boyutu ve şarj ölçmek. Deiyonize su ve% 70 etanol kullanarak MicroCer bir kullanım sonrası temizlik yapın. HPLC cihazı kullanılarak nanoART formülasyonları konsantrasyonunu ölçün. Bizim durumumuzda, tarafından gönderilen numunelerin C8 koruma kartuşu ile YMC Oktil C8 kolon (Waters A.Ş., Milford, MA) üzerine üç nüsha 20 mcL enjeksiyonları kullanarak ters faz HPLC ile değerlendirdi. % 48 asetonitril /% 52 25mm KH 2 PO 4, pH 4.15 oluşan Mobil faz, 0.4 ml / dak 'da 272 nm dalga boyunda UV / Vis algılama pompalanır. Tüm ilaç ölçümleri için, kantitatif metanol hazırlanan her ücretsiz ilaç (,025-100 mcg / mL) standart bir eğrisine göre belirlenir. 2. Avestin EmulsiFlex C5 kullanarak NanoART Homojenizasyon Analitik bir denge kullanarak nanoformulations ve 10 mM HEPES tamponu, pH 7.8 tam dispersiyon elde etmek için T-18 Ultraturrax mikser kullanarak onları karıştırmak için kullanılacak olan ilaç kristalleri ve çeşitli yüzey ölçün. Süspansiyon homojenleştirici gemi transferi ve devridaim başlar. Soğutucu önce numune homojenize başlayan açık olduğundan emin olun. Metre 20.000 ± 2.000 psi okur ve hedef parçacık boyutu elde edilene kadar devam homojenize kadar kademeli basınç artırın. 60 dakika – Bu genellikle 45 arasında sürer. Periyodik olarak bir kısım (~ 1 ml) alın ve bir Zetasizer (Tablo 1) kullanarak örnek boyutu ve şarj ölçmek. Homojenizatör homojenize edilmiş süspansiyon, 50 ml santrifüj tüplerine transferi ve 10.000 rpm (10.174 RCF) 30 dakika boyunca santrifüj. Tamamlanmasının ardındansantrifüj döngüsü, süpernatant miktarını ölçmek ve taze sürfaktan çözümün eşit hacmi ile değiştirin. Tabanda sonra, C5 homojenizatör süspansiyon aktarın. Dolaşımını yeniden başlatın ve 20.000 ± 2.000 psi homojenizasyon basıncı dönmek ve 30 dakika süreyle homojenize. Zetasizer (Tablo 1) kullanılarak formülasyonu boyutu ve şarj ölçün. Deiyonize su ve çözücü olarak etanol ile birim sonrası temizlik yapın. HPLC cihazı kullanılarak örneklerin konsantrasyonu ölçün. 3. Cole Parmer Ultrasonik İşlemci kullanarak Sonikasyon Diklorometan bir cam behere 50 ml ölçün. Analitik terazi ile poli Tedbir 6 g (laktik-ko-glikolik asit) (PLGA), tam bir çözülme görülmektedir kadar diklorometan ekleyin ve karıştırın. 1,25 g ilaç kristalleri ölçün ve diklorometan / PLGA çözüm ekleyin. Tam çözülme elde etmek için karıştırın. % 1 polivinil alkol (PVA) sürfaktan çözüm olun ve bir buz banyosunda kullanarak serin. Sürfaktan çözüm, çözünmüş ilaç içeren organik çözüm eklenmesinden önce serin olduğundan emin olun. % 1 PVA sürfaktan çözüm içine ilaç çözüm dökün ve% 50 genlik ultrasonicator başlatmak. Sürfaktan çözüm, bir buz banyosunda yerleştirildiğinden emin olun. ~ Örnekleri küçük partiler için% 30 genlik sonikatör genliği düşebilir. 10 dakika boyunca örnek sonikasyon. (~ 1 ml), partikül boyut analizi (Tablo 1) için küçük bir kısım dışarı atın. Parçacıkların büyüklüğü 1.5 mm daha fazla ise, en fazla toplam 16 dakika kadar 2 dakika aralıklarla numune sonikasyon. 20x ve belge gözlemlerini (Şekil 1A) mikroskop altında örnekleri dikkate alınmalıdır. Kalan süspansiyon için yeterli bir girdap oluşturmak ve oda sıcaklığında bir gece karıştırmaya devam heyecan tabak kullanın. 8 g mannitol bir balona tartılır ve 80 ml RO su ekleyin. Tam bir çözülme görülmektedir kadar karıştırın ve oda sıcaklığında saklayın. Örnekleri liyofilize gerekiyorsa santrifüj sonra tabanda için kullanılacaktır. 24 saat sonra süspansiyon toplayın ve 50 ml santrifüj tüplerine dökün. 5, 20 dakika boyunca 8.000 rpm hızında örnekleri Santrifüj ° C Filtreli ters osmoz (RO) su ve 75 ml% 0.5 cetyl trimethylammonium bromür (STAB) sürfaktan diğer yarısı 75 mL supernatant ve tekrar süspansiyon yarısı örnek Durusu. 5 ° C'de 20 dakika 8000 rpm hızında numuneleri tekrar santrifüj ve toplam 20 ml mannitol çözüm her pelet tekrar süspansiyon haline getirin. Ikinci tabanda sonra, (Tablo 1) Zetasizer kullanılarak partiküllerin boyutunu ölçmek. Kalan süspansiyon aktarmak ve onları lyophilizer içine yerleştirmek için uygun şişeleri kullanın. HPLC cihazı kullanılarak örneklerin konsantrasyonu ölçün. 4. NanoART Morfoloji NanoART süspansiyon ve kısaca sonication probu ile 5 saniye boyunca% 20 genlik az sonikasyon. 1.7 mL mikrosantrifüj tüp ve 10 saniye vorteks içinde RO su içine 1.5 ml süspansiyon 10 mcL aktarın. 50 mcL su nanoART çözüm ve 0.2 mikron polikarbonat filtrasyon membran (Nuclepore Parça-Etched) ile birleştirilmiş bir Swinnex 13 polipropilen filtre tutucu oluşan bir filtrasyon aparatı transferi bir örnek ele alalım. Filtrasyon aparatı 50 mcL 0.2μm önce seyreltilmiş ilaç süspansiyon ek distile su filtre ile astarlanmalıdır. Tüm çözüm hacmi tamamen filtrasyon membran geçmiş çekilir kadar Vakum aparatı uygulanır. Membran kuruduktan sonra, çift sopa iletken karbon bant kullanarak bir alüminyum pin saplama yapıştırılmış ve paladyum ile kaplanmıştır sputter. Numune saplama sonra bizim durumumuzda, bir JEOL JSM6300F alçak gerilim, saha emisyon taramalı elektron mikroskobu (Şekil 2) kullanarak görüntülü. 5. NanoART Görselleştirme Hazırlanan nanoART süspansiyonlar ve sonication probu ile% 20 genlik az 10 saniye süreyle sonikasyon. Kayma ve ters bir mikroskop bir mikroskop lamı kapağı atın. Kapak kayma fosfat 100 mcL nanoART süspansiyon 15 mcL tamponlu salin (PBS) ve birkaç kez yukarı ve aşağı pipetleme karışım karıştırın. 20x objektif (Şekil 3) kullanarak nanopartiküller gözünüzde canlandırın. NanoART, Biyolojisi 6. Kan Borne, Monosit ve monosit-türevli Makrofajlar (MDM), izolasyonu ve Hazırlık HIV-1 ve hepatit seronegatif donörlerin leukapheresis insan monositler edinin ve akıntıya karşı santrifüj Yıkayarak tasviye hücreleri arındırmak. Anti-CD68 (klon KP immunolabeling hücre saflık değerlendirinWright-lekeli cytospins 1 -1). DMEM Kültür saflaştırılmış monositler 1×10 bir konsantrasyon% 10 ısı inaktive toplanmış insan serumu,% 1 glutamin, 50 mg / ml gentamisin, 10 mcg / ml siprofloksasin ve 1000 U / ml rekombinant insan makrofaj koloni uyarıcı faktör (MCSF) ile takviye 37 6 hücre / ml ° C,% 5 CO 2 ile nemlendirilmiş bir atmosferde. Amacıyla 7 gün 6 kuyucuğu ve kültür hücreleri de başına Levha 2×10 6 hücre monositler makrofaj 1 ayırt etmek için izin vermek. (Şekil 3A) 7. Hücre Alımı ve Toplama Nihai konsantrasyonu 100 mcM nanoART (MCSF olmadan) kültür medya ile karıştırın ve her iyi tedavi orta 1 ml ekleyin. İstediğiniz zaman gelin, ya da hücreler tam nanoART (Şekil 2) yüklü olan tüm tedavi aracı kaldırmak ve hücreleri tarafından alınmamıştır herhangi bir parçacıkları çıkarmak için 1 ml PBS ile hücreleri 3 kere yıkayın. 1 mL PBS kuyunun dibinden, bir hücre kaldırıcı ile yapışık hücrelere kaldırmak ve 1.7 mL mikrosantrifüj tüp 2-4 içine yerleştirin. 4 1.000 RCF hücreler Santrifüj ° C'de 10 dakika. Süpernatantı ve% 100 metanol 200 mcL ekleyin. Hücrelerin Lyse ve% 20 genlikte pelet sonicating sonicating probu ile (2-5 saniye) kısa bir süre nanoART çözülür. -80 Yılında Mağaza örnekleri ° C ilaç içeriğini analiz etmek için hazır olana kadar. 8. NanoART, intrasellüler Tutma MDM 7.1 'de açıklandığı gibi davranın. 7.2 'de açıklandığı gibi hücrelere istenilen zaman noktada, yıkayın, ancak hücreleri derhal kadar kazıma yerine, 0.1 M fosfat tamponu (pH 7.4)% 3 glutaraldehid bir çözüm oda sıcaklığında 15 dakika hücreleri gidermek ve bunları düzeltmek için 10 0.1 M fosfat tamponu (pH 7.4)% 1 osmiyum tetroksit dakika. 7.2 'de açıklandığı gibi 1 mL PBS içinde fiksatif ve kazıma hücreleri çıkarın. Ayrıca, toplamak ve 7.2 'de tarif olarak hücreler santrifüj; ama yerine pelet metanol ekleyerek, glutaraldehit fiksatif çözüm 200 mcL ekleyin. Mikrotom ile ince (80 nm) bölüme hücre pelletini kesin. Uranil asetat ve kurşun sitrat ile bölümleri Leke. Transmisyon elektron mikroskobu (Şekil 4) ile boyanan kesitler dikkate alınmalıdır. 9 – ART Yayın 7,1-7,2 de açıklandığı gibi hücreleri davranın; Ancak, yıkandıktan sonra hücreleri toplamak yerine, MCSF olmadan ve nanoART olmadan 2 mL hücre kültür ortamı ile PBS yerine. Belirtilen gün, ya da orta sarı, döviz yarım dönüm hücre kültür ortamı ile gösterilir. Istenilen gün 7.2-7.3 açıklanan çoğaltmak hücreleri ile birlikte hücre orta 1 mL toplamak. Süreç hücreleri gibi 7.3 'de açıklanmıştır. Süreç, 10 saniye süreyle tam hız% 100 metanol ve vorteks 1 mL 150 mcL orta örnek ekleyerek orta. Ardından 10 dakika boyunca 21.000 RCF örnekleri santrifüj. Süpernatantı ve yeni bir tüpe transfer. Bir vakum santrifüj metanol buharlaşması, bu örnek bağlı olarak 1 ila 4 saat kadar sürebilir. Numuneler -80 ° C ilaç analizi için hazır olana kadar saklayın. 10 Konfokal Mikroskop NanoART Gerçek-zamanlı Alımı Vybrant Hücre Etiketleme Çözümü üretimi talimatı aşağıdaki gibi bir hücre etiketleme çözümü kullanarak hücrelerin adım 6.2 ve etiket olgun MDM alın. Hücrelerin herhangi bir aşırı boya kaldırmak için 1 ml kültür ortamı kullanılarak 3 kez durulayın. NanoART floresan etiketli nanoART 7.1 kullanarak adım gibi kültür ortamı ile karıştırın. Konfokal bir mikroskop ile görüntüleme hemen önce etiketli nanoART ile tedavi orta ekleyin. 60x hedefi 5 (Video 1 ve 2) ile 4 saat boyunca her 30 saniyede bir görüntü yakalayabilirsiniz. HIV-1 enfeksiyon ve enfektivite Tahliller 11. HIV-1 ADA Enfeksiyon 9.1-9.3 olarak açıklandığı gibi hücrelere davranın. 0.01 viral parçacıkların / 24 saat 1 hücre ve inkübe bir enfeksiyon çokluğu HIV-1 ADA içeren MCSF olmadan istenilen günlerinde, bütün orta kaldırmak ve orta ile değiştirin. Viral orta çıkarın ve taze, virüssüz medya ile değiştirin. 10 gün boyunca Kültür hücreleri her gün yarım orta alışverişi ya da 6 (Şekil 5) hücreleri canlı tutmak için gerekli. On gün sonrası enfeksiyon, 96 plaka, 10, her iyi, yerden orta mcL toplamak ve mağaza -80 ° C retroviral (ters) transkriptaz analizi gerçekleştirmek için hazır olana kadar. 12. Reverse Transcriptase (RT) Testi Her 10 mcL örnek adım 11.3 ile 10, 100 mM Tris-HCl (pH 7.9), 300 mM KCl, 10 mM DTT,% 0.1 nonil phenoxylpolyethoxylethanol-40 (NP-40) ve su içeren bir çözüm mcL karıştırın. Bu karışımı, 37 ° C'de 7 15 dakika inkübe edin. <l i> Daha sonra 50 mM Tris-HCl (pH 7.9), 150 mM KCl, 5 mM DTT, 15 mM MgCl 2, 0.05% NP-40, 10 mikrogram / ml poli (A), 0.250 içeren bir çözüm 25 mcL ekleyin 37 U / ml oligo d (T) 12-18, ve her iyi ve inkübe 10 μCi / ml 3 H-TTP ° C de 18 saat 7 için . Inkübasyon sonrasında buz% 10 trikloroasetik asit (TCA), her bir kuyunun 50 mcL ekleyin. Cam elyaf filtreler üzerine kuyuların Harvest ve β-sintilasyon spektroskopisi 7 3 H-TTP birleştirmek için filtreleri değerlendirmek. 13. HIV-1p24 Saptamalar Retroviral transkriptaz orta örneği PBS 3 kez 1 mL ile durulama adım 11.3 kaldırıldı çoğaltmak hücreleri yıkayın. 4 gece Fix% 4 paraformaldehid ile hücreleri ° C Ertesi sabah hücreleri 3 kez PBS ile durulayın. HIV enfeksiyonu görselleştirmek için fare monoklonal antikorlar (1:10, Dako, Carpinteria, CA), HIV-1 p24 kullanın. 40x objektif (Şekil 6) kullanarak parlak alanının altında Resim hücreleri. 14. Temsilcisi Sonuçlar: Ilaç Boyut (Nm) PDI Ücret (Mv) Yüzeyaktif IDV 1052 0,286 -24,58 % 0.5 'P188,% 5.0 SDS, 9.25% Sakkaroz RTV 233 0,273 -7,47 % 0.5 'P188, 9.25% Sakkaroz ATZ 840 0,192 +25,47 % 0.5 'P188, 0.1% MPEG 2000-DSPE, 1.0% DOTAP, 9.25% Sakkaroz EFV 347 0,235 -13,52 % 1.0 PVA NanoART Tablo 1: Fiziksel özellikleri Tablo nanoART formülasyonlarının fiziksel özellikleri için potansiyel temsilcisi değerleri belirtilen yüzey kullanılarak üretilen görüntüler. Değerler ortalama çapı dağınık ışık yoğunluğu, polydispersity indeksi (PDI, partikül boyutu dağılımı tahmini), ve çeşitli nanoformulation örnekler için elde edilen zeta potansiyel değerleri dayalı içerir. Tabloda kullanılan kısaltmalar: IDV: İndinavir; RTV: ritonavir, ATV: atazanavir; EFV: effavirenz; PVA: polyvinylalcohol; SDS sodyum dodesil sülfat; P188: poloxamer 188 (aynı zamanda Pluronic F68 olarak adlandırılır), MPEG-2000-DSPE: metil-poli (etilen-glikol) 1,2-distearoyl fosfatidil-etanolamin; DOTAP: (1-oleoyl-2-[6 – [(7-nitro-2-1 ,3-benzoxadiazol-4-il) amino] hexanoyl] – 3-trimethylammonium propan. ŞEKİL 1 nanoART üretiminde kullanılan çeşitli yöntemler özetleyen akış çizelgesi. Şekil 1 nanoART üretimi için kullanılan çeşitli yöntemler özetlenmiştir. Akış şeması, ilgili yöntemleri kritik aşamalarında her zaman tahsis beklenen içerir. ŞEKİL 2 istenen ve istenmeyen NanoART morfolojisi Temsilcisi görüntüler. Tarama elektron mikroskobu RTV nanoART analizi (büyütme, 15.000 X) homojenizasyon, ıslak freze ve 0,2 mikron polikarbonat filtrasyon membran üst sonication üretti. Ölçü çubuğu tüm çerçeveler içinde, 2.0 mikron eşittir. İstenen nanoART, ortalama olarak, aynı ya da benzer bir şekle sahip olma eğilimindedir düzgün kenarlı küçük (≤ 2 mm) kendi kendine yeten parçacıklar oluşur. İstenmeyen nanoART, hem boyutu ve şekli çok farklıdır ve birbirlerine ve / veya sopa sigorta. ŞEKİL 3 arzu nanoART çözümü ve MDM nanoART alarak Görüntüler. Homojenize RTV-NP ve MDM Aydınlık alan mikroskobu görüntüleri (20x objektif kullanılarak elde) nanoART kaplıyor. Bir cam kapak kayma PBS 100 mcL RTV-NP çözümü 10 mcL birleştirerek sonra, parçacıklar görülebilir ve (A), bağımsız olarak tanımlanabilen büyük parçacıkları sadece birkaç kum benzerler. Image tamamen farklılaşmış ve nanoART tedavi (B) önce iğsi MDM. Hücrelerin nanoART çektikten sonra, bu rengi koyulaşabilir ve çekirdekleri nanoART perinükleer dağıtım nedeniyle daha belirgin hale, ancak onlar hala iğsi hücre gövdesi (C) korumak. Hücrelerin çekirdekleri, gizlenmiş haline nanoART aşırı haline ve yuvarlak hücreler iğsi yapısını kaybetme ve potansiyel olarak iyi (D) alt ayrılmakta. 4 "/> ŞEKİL 4 MDM içine nanoART hücresel esas Onay. Transmisyon elektron mikroskobu (büyütme, 15.000 x), ıslak öğütme (B), (C) sonikasyon RTV-NP, ve tedavi edilmezse hücreleri (D homojenizasyon (A), RTV-NP RTV-NP maruz MDM içine nanoART alımı gösterir .) Hücreler içinde, nanoART geometrik şekli ile kolaylıkla tespit edilebilir. Kontrol hücresi (D) belirgin bir geometrik yapıları olmayışına dikkat edin. Her parçacığın bir örnek ana hatlarıyla: homojenizasyon için kırmızı (A), ıslak öğütme (B), yeşil (C) sonikasyon için mavi. Parçacık yapısı SEM ile görüldü ki benzer. Ölçü çubuğu tüm çerçeveler içinde, 5.0 mikron eşittir. ŞEKİL 5 nanoART antiretroviral etkinliğini test etmek için yöntemi diyagramı. HIV-1 ADA maruz sonra viral replikasyon MDM ilk nanoART ile tedavi edilmelidir inhibe ve nanoART yeteneğini test etmek için. ART serbest çalışmalara benzer şekilde, MDM nanoART ile yüklenir ve sonra içselleştirilmiş henüz herhangi bir partikülleri uzaklaştırmak için yıkanır. NanoART yüklü MDM sonra her gün bir yarım orta alışverişi ile 15 gün öncesine kadar kültüre edilmektedir. MDM bu sefer sırasında (genellikle gün 1, 5, 10 ve 15), HIV-1 ADA ile meydan . Her viral maruziyet hücreleri enfeksiyon ilerleme sağlamak amacıyla 10 gün süreyle kültüre sonra. Gün 10 sonrası enfeksiyon ortam örnekleri RT analizi ve p24 antijen için sabit ve boyanmış hücreler toplanır. Sigara nanoART tedavi MDM, enfekte olan ve olmayan, aynı zamanda kültürlü ve paralel olarak p24 antijeni ve RT aktivitesi varlığı için test edilmektedir. ŞEKİL 6 p24 boyanma HIV-1 ile enfekte MDM nanoART etkinliğinin test edilmesi. RTV-NP Parlak alan görüntüleri (20x amacı), 10 gün HIV-1 ADA ile meydan sonra MDM tedavi edilmelidir . Hücreleri virus1 gün sonrası nanoART tedavi (A) ile karşı karşıya iken enfeksiyon; çoğu hücreleri (A içerlek oklarla gösterilen) sitoplazma içinde NP varlığı dikkat. Bazı hücreler (inset B oklarla gösterilen) NP muhafaza varlığı, ancak unutmayın; Enfeksiyon hücreleri nanoART tedavi (B) 10 gün sonra virüse maruz edildiğinde çok daha az (D) nanoART tedavi edilmezse hücrelerine kıyasla daha az olmasına rağmen, mevcut oldu gün 1-nanoART sonrası tedavi (A İçerlek) daha az. Görüntü ne nanoART ne de bulaşmış (C) ile tedavi edilen hücrelerin hücre sitoplazma içinde NP dikkat eksikliği (C İçerlek). NanoART ile tedavi edilen, ancak HIV-1 ADA (D) maruz kalmayan hücrelerde Image . VIDEO 1 MDM tarafından yoksul RTV-NP alımını hücre konfokal mikroskobi yaşayın. MDM Floresan mikroskopi Vybrant Dio hücre-etiketleme çözümü ile yeşil etiketli ve RTV-NP kırmızı etiketli ile tedavi. Bir görüntü 60x büyütme az 4 saat süreyle her 30 saniyede çekildi. videosunu izlemek için tıklayın VIDEO 2 MDM tarafından başarılı RTV-NP alımını hücre konfokal mikroskobi yaşayın. MDM Floresan mikroskopi Vybrant Dio hücre-etiketleme çözümü ile yeşil etiketli ve RTV-NP kırmızı etiketli ile tedavi. Bir görüntü 60x büyütme az 4 saat süreyle her 30 saniyede çekildi. videosunu izlemek için tıklayın