Eletrônica de von Frey associada à Escala de Cartas de Camundongos para Avaliação de Alodinia e Dor em Camundongos Infectados por Trypanosoma evansi
Summary
Aqui, apresentamos um protocolo para avaliar a nocicepção em camundongos infectados com Trypanosoma evansi, utilizando o aparelho eletrônico de von Frey como ferramenta, medindo limiares mecânicos da pata traseira e vísceras.
Abstract
A patogênese das doenças infecciosas ainda é um campo complexo de estudar. O curso de vários sinais clínicos, como alodinia e dor, pode ser observado em animais domésticos. No entanto, o conhecimento de suas vias e o tratamento correto necessitam de experimentos controlados, muitos deles utilizando animais de laboratório. A medição de alterações nos limiares mecânicos da pata traseira e das vísceras é uma técnica útil para observar mudanças na percepção da dor em roedores. A resposta de abstinência pode ser medida primeiro em testes de linha de base, o que cria um melhor controle dos grupos experimentais. Testes subsequentes podem ser realizados após a indução da infecção e adição de medicamentos ao protocolo. O uso de um aparelho eletrônico de von Frey associado ao uso de uma escala facial para observar alterações semelhantes à dor permite uma avaliação simples, precisa e consistente para avaliar a alodinia e a dor em camundongos. Assim, experimentos utilizando a presente metodologia para infecção por Trypanosoma evansi representam um método útil para avaliar alodinia e dor em animais infectados em laboratório, que pode ser aplicado ao tratamento convencional para animais de criação.
Introduction
O Trypanosoma evansi é o agente etiológico da doença denominada “surra” ou “mal-das-cadeiras” na América do Sul 1,2. Comumente acomete equinos e bovinos, mas também a fauna silvestre, sendo transmitida por morcegos hematófagos, tabanídeos e picadas de moscas estomoxas 1,3. A surra é uma doença importante em animais domésticos, que pode ser fatal na ausência do tratamento correto, exibindo sinais clínicos inespecíficos, como anemia, perda de apetite e peso, fraqueza muscular e aborto, que podem variar de acordo com o hospedeiro e a região geográfica 2,4,5,6.
A expressão de alodinia e dor em animais infectados durante o curso da doença ainda é um tópico novo 2,7. O desejo de entender a patogênese por trás desses sinais é um passo importante para melhorar e refinar o tratamento atualmente utilizado, adicionando drogas analgésicas eficazes ao protocolo tripanocidaclássico 5,6. Nesse cenário, a possibilidade de replicar a doença usando um modelo murino representa uma vantagem, pois os camundongos podem ser facilmente mantidos em ambientes controlados em laboratório e, portanto, produzir resultados mais consistentes do que experimentos de campo usando gado.
Um limiar mecânico é comumente obtido usando um aparelho eletrônico de von Frey (EvF) para a avaliação da alodinia em um grande número de experimentos 2,8,9. Este dispositivo é usado para avaliar a sensibilidade do tecido à estimulação mecânica: uma vez que o aparelho toca a pata do animal, através de uma ponta de 20-200 μL acoplada ao dispositivo, a força com que o animal retira a pata é registrada.
Os roedores são geralmente usados como animais padrão nesses experimentos, e a maioria dos resultados é extrapolada para outras espécies, já que a maioria das doenças pesquisadas vem de outras espécies nas quais seria difícil realizar um estudo controlado. Além disso, alodinia e dor estão intimamente relacionadas. O uso de uma escala facial específica para avaliar a dor em camundongos infectados desempenha um papel importante como adjuvante confirmador para afirmar a presença de dor durante o curso da infecção por T. evansi 2,10.
Neste protocolo, demonstramos um novo modelo para avaliar alodinia e dor em camundongos experimentalmente infectados com T. evansi, mostrando uma alta correlação entre as variáveis, mostrando-se assim um modelo forte. Além disso, requer um pequeno número de pesquisadores para realizar todo o procedimento, diminuindo a chance de interferência humana durante o experimento. Também permite ao investigador replicar a doença-alvo durante um curso agudo e adicionar vários medicamentos de tratamento diferentes no desenho experimental, obtendo assim resultados consistentes em um curto período.
Protocol
Representative Results
Discussion
Uma etapa crítica em experimentos envolvendo animais infectados é o controle dos níveis de parasitemia. Diferentes cepas de T. evansi podem se comportar de maneiras divergentes em camundongos, levando de infecções agudas a crônicas 2,4,5,6. Além disso, alterações na dose de infecção podem diminuir ou prolongar o tempo de sobrevivência dos camundongos. Portanto, a obtenção…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores agradecem especialmente à Universidade do Estado de Santa Catarina pelo apoio financeiro, ao Laboratório de Farmacologia pelos animais e pelo espaço, e ao Laboratório de Bioquímica de Hemoparasitas e Vetores pela amostra de sangue criopreservado infectado com T. evansi utilizada nesses experimentos.
Materials
| 26 G 1/2" needle coupled to insulin syringe | TKL | 80288090100 | Used to infund solutions on laboratory animals |
| Accessories for von Frey analgesimeter | INSIGHT | EFF 303 | Containment box with support for digital analgesimeter assessment |
| D-(+)-Glucose | SIGMA-ALDRICH | G7021 | A monosaccharide which is the main source of energy in the form of ATP for living organisms |
| Digital analgesimeter | INSIGHT | von Frey Wi-Fi | The von Frey Wi-Fi is a portable device used to assess tissue sensitivity to mechanical stimuli |
| Gilson type 10 µL polypropylene tip | CRALPLAST | 18261 | Polypropylene to be used on eletronic von Frey apparatus, recommended for hind paw allodynia assessment |
| Laboratory water bath | BEING INSTRUMENT | BW-22P | Used to heat liquid and semi-solid substances contained in appropriate recipients to specific temperature |
| Phosphate buffered saline | SIGMA-ALDRICH | 806552 | A balanced salt solution buffer used for a variety of cell culture applications |
| Swiss mice (Mus musculus) from both gender | UFSC | Swiss Webster | Laboratory animals used for controlled experiments |
| Trypanosoma evansi cryiopreserved sample | UDESC | – | Sample used to infect all mice, ceded by the Hemoparasites and Vectors Biochemistry Laboratory |
| Universal type 10 µL polypropylene tip | CRALPLAST | 18171 | Polypropylene to be used on eletronic von Frey apparatus, recommended for visceral allodynia assessment |
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