Von Frey electrónico asociado con la escala de muecas de ratón para evaluar la alodinia y el dolor en ratones infectados con Trypanosoma evansi
Summary
En este trabajo se presenta un protocolo para evaluar la nocicepción en ratones infectados con Trypanosoma evansi, utilizando como herramienta el aparato electrónico de von Frey, midiendo umbrales mecánicos de la pata trasera y vísceras.
Abstract
La patogénesis de las enfermedades infecciosas sigue siendo un campo complejo de estudiar. En los animales domésticos puede observarse el curso de varios signos clínicos, como alodinia y dolor. Sin embargo, el conocimiento de sus vías y el tratamiento correcto requieren experimentos controlados, muchos de ellos con animales de laboratorio. La medición de los cambios en los umbrales mecánicos de la pata trasera y las vísceras es una técnica útil para observar los cambios en la percepción del dolor en roedores. La respuesta de retirada se puede medir primero en las pruebas de referencia, lo que crea un mejor control de los grupos experimentales. Las pruebas posteriores se pueden realizar después de inducir la infección y agregar medicamentos al protocolo. El uso de un aparato electrónico de von Frey asociado con el uso de una escala facial para observar cambios similares al dolor permite una evaluación simple, precisa y consistente para evaluar la alodinia y el dolor en ratones. Por lo tanto, los experimentos que utilizan la metodología actual para la infección por Trypanosoma evansi representan un método útil para evaluar la alodinia y el dolor en animales infectados de laboratorio, que se puede aplicar al tratamiento convencional para animales de ganado.
Introduction
El Trypanosoma evansi es el agente etiológico de la enfermedad denominada “surra” o “mal-das-cadeiras” en América del Sur 1,2. Afecta comúnmente a equinos y ganado, pero también a la fauna silvestre, siendo transmitida por picaduras de moscas de murciélagos hematófagos, tabánidos y estomoscas 1,3. La surra es una enfermedad importante en los animales domésticos, que puede ser mortal en ausencia del tratamiento correcto, presentando signos clínicos inespecíficos como anemia, pérdida de apetito y peso, debilidad muscular y aborto, que pueden variar según el huésped y la región geográfica 2,4,5,6.
La expresión de alodinia y dolor en animales infectados durante el curso de la enfermedad es todavía un tema nuevo 2,7. La necesidad de comprender la patogenia detrás de estos signos es un paso importante para mejorar y perfeccionar el tratamiento actualmente utilizado, mediante la adición de fármacos analgésicos eficaces al protocolo clásico de tripanocidas 5,6. En este escenario, la posibilidad de replicar la enfermedad utilizando un modelo murino representa una ventaja, ya que los ratones se pueden mantener fácilmente en ambientes controlados en el laboratorio y, por lo tanto, arrojar resultados más consistentes que los experimentos de campo con ganado.
Un umbral mecánico se obtiene comúnmente utilizando un aparato electrónico de von Frey (EvF) para la evaluación de la alodinia en un gran número de experimentos 2,8,9. Este dispositivo se utiliza para evaluar la sensibilidad de los tejidos a la estimulación mecánica: una vez que el aparato toca la pata del animal, a través de una punta de 20-200 μL unida al dispositivo, se registra la fuerza con la que el animal retira la pata.
Los roedores se utilizan generalmente como animales estándar en estos experimentos, y la mayoría de los resultados se extrapolan a otras especies, ya que la mayoría de las enfermedades investigadas provienen de otras especies en las que sería difícil realizar un estudio controlado. Además, la alodinia y el dolor están íntimamente relacionados. El uso de una escala facial específica para evaluar el dolor en ratones infectados juega un papel importante como coadyuvante confirmador para afirmar la presencia de dolor durante el curso de la infección por T. evansi 2,10.
En este protocolo, demostramos un modelo novedoso para evaluar la alodinia y el dolor en ratones infectados experimentalmente con T. evansi, mostrando una alta correlación entre variables, demostrando así ser un modelo fuerte. Además, requiere un pequeño número de investigadores para llevar a cabo todo el procedimiento, lo que disminuye la posibilidad de interferencia humana durante el experimento. También permite al investigador replicar la enfermedad objetivo durante un curso agudo y añadir varios fármacos de tratamiento diferentes en el diseño experimental, obteniendo así resultados consistentes en un corto período de tiempo.
Protocol
Representative Results
Discussion
Un paso crítico en los experimentos con animales infectados es el control de los niveles de parasitemia. Diferentes cepas de T. evansi pueden comportarse de manera divergente en ratones, lo que lleva a infecciones agudas a crónicas 2,4,5,6. Además, los cambios en la dosis de infección pueden disminuir o prolongar el tiempo de supervivencia de los ratones. Por lo tanto, se recomiend…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores agradecen especialmente a la Universidad Estadual de Santa Catarina por el apoyo financiero, al Laboratorio de Farmacología por los animales y el espacio, y al Laboratorio de Bioquímica de Hemoparásitos y Vectores por la muestra de sangre criopreservada infectada con T. evansi utilizada en estos experimentos.
Materials
| 26 G 1/2" needle coupled to insulin syringe | TKL | 80288090100 | Used to infund solutions on laboratory animals |
| Accessories for von Frey analgesimeter | INSIGHT | EFF 303 | Containment box with support for digital analgesimeter assessment |
| D-(+)-Glucose | SIGMA-ALDRICH | G7021 | A monosaccharide which is the main source of energy in the form of ATP for living organisms |
| Digital analgesimeter | INSIGHT | von Frey Wi-Fi | The von Frey Wi-Fi is a portable device used to assess tissue sensitivity to mechanical stimuli |
| Gilson type 10 µL polypropylene tip | CRALPLAST | 18261 | Polypropylene to be used on eletronic von Frey apparatus, recommended for hind paw allodynia assessment |
| Laboratory water bath | BEING INSTRUMENT | BW-22P | Used to heat liquid and semi-solid substances contained in appropriate recipients to specific temperature |
| Phosphate buffered saline | SIGMA-ALDRICH | 806552 | A balanced salt solution buffer used for a variety of cell culture applications |
| Swiss mice (Mus musculus) from both gender | UFSC | Swiss Webster | Laboratory animals used for controlled experiments |
| Trypanosoma evansi cryiopreserved sample | UDESC | – | Sample used to infect all mice, ceded by the Hemoparasites and Vectors Biochemistry Laboratory |
| Universal type 10 µL polypropylene tip | CRALPLAST | 18171 | Polypropylene to be used on eletronic von Frey apparatus, recommended for visceral allodynia assessment |
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