Trypanosoma evansi-Infected Mice의 Allodynia 및 통증을 평가하기 위해 Mouse Grimace Scale과 관련된 Electronic von Frey
Summary
여기에서는 Trypanosoma evansi에 감염된 마우스의 통각을 평가하기 위한 프로토콜을 제시하며, 전자 von Frey 장치를 도구로 사용하여 뒷발과 내장의 기계적 역치를 측정합니다.
Abstract
감염성 질환 발병기전은 여전히 연구해야 할 복잡한 분야입니다. 이질증 및 통증과 같은 여러 임상 징후의 경과가 가축에서 관찰 될 수 있습니다. 그러나 그들의 경로와 올바른 치료에 대한 지식은 통제된 실험을 필요로 하며, 그 중 많은 부분이 실험실 동물을 사용합니다. 뒷발과 내장의 기계적 역치 변화를 측정하는 것은 설치류의 통증 인식 변화를 관찰하는 데 유용한 기술입니다. 철수 반응은 기준선 테스트에서 먼저 측정할 수 있으며, 이는 실험 그룹을 더 잘 제어할 수 있도록 합니다. 감염을 유도하고 프로토콜에 약물을 추가한 후 후속 검사를 수행할 수 있습니다. 통증과 같은 변화를 관찰하기 위해 안면 척도 사용과 관련된 전자 von Frey 장치를 사용하면 마우스의 이질증 및 통증을 평가하기 위한 간단하고 정확하며 일관된 평가가 가능합니다. 따라서, 트리파노소마 에반시 감염에 대한 본 방법론을 사용한 실험은 실험실 감염 동물에서 이질증 및 통증을 평가하는 유용한 방법을 나타내며, 이는 가축 동물에 대한 기존 치료에 적용될 수 있다.
Introduction
트리파노소마 에반시(Trypanosoma evansi)는 남아메리카에서 “수라(surra)” 또는 “말-다스-카데이라스(mal-das-cadeiras)”라고 불리는 질병의 원인이다 1,2. 이 병은 일반적으로 말과 소에 영향을 미치지만, 야생 동물군에도 영향을 미치며, 혈구박쥐, 타바니드, 기공파리에 의해 전염된다 1,3. Surra는 가축의 주요 질병으로 올바른 치료가 없을 경우 치명적일 수 있으며 빈혈, 식욕 및 체중 감소, 근육 약화 및 유산과 같은 비특이적 임상 징후를 나타낼 수 있으며 이는 숙주 및 지리적 지역에 따라 다를 수 있습니다 2,4,5,6.
질병이 진행되는 동안 감염된 동물에서 이질증과 통증의 발현은 여전히 새로운 주제입니다 2,7. 이러한 징후 뒤에 있는 발병 기전을 이해하려는 욕구는 고전적인 트리파노시달 프로토콜 5,6에 효과적인 진통제를 추가함으로써 현재 사용되는 치료법을 개선하고 정제하기 위한 중요한 단계입니다. 이 시나리오에서는 쥐를 실험실의 통제된 환경에서 쉽게 보관할 수 있으므로 가축을 사용한 현장 실험보다 더 일관된 결과를 얻을 수 있기 때문에 쥐 모델을 사용하여 질병을 복제할 수 있는 가능성이 있습니다.
기계적 임계값은 일반적으로 방대한 수의 실험에서 이질체를 평가하기 위해 전자 폰 프레이(EvF) 장치를 사용하여 얻어집니다 2,8,9. 이 장치는 기계적 자극에 대한 조직의 민감도를 평가하는 데 사용됩니다 : 장치가 장치에 부착 된 20-200 μL 팁을 통해 동물의 발에 닿으면 동물이 발을 빼내는 힘이 기록됩니다.
설치류는 일반적으로 이러한 실험에서 표준 동물로 사용되며, 대부분의 연구 된 질병은 통제 된 연구를 수행하기 어려운 다른 종에서 유래하기 때문에 대부분의 결과는 다른 종으로 외삽됩니다. 더욱이, 이질증과 통증은 밀접하게 관련되어 있다. 감염된 마우스의 통증을 평가하기 위해 특정 안면 척도를 사용하는 것은 T. evansi 감염 과정 동안 통증의 존재를 확인하기 위한 확인 보조제로서 중요한 역할을 합니다 2,10.
이 프로토콜에서는 T. evansi에 실험적으로 감염된 마우스의 이질증과 통증을 평가하기 위한 새로운 모델을 보여주며, 변수 간에 높은 상관관계를 보여 강력한 모델임을 입증했습니다. 또한 전체 절차를 수행하는 데 소수의 연구원이 필요하므로 실험 중 사람의 간섭 가능성이 줄어듭니다. 또한 연구자가 급성 과정 동안 표적 질환을 복제하고 실험 설계에 여러 가지 다른 치료 약물을 추가하여 단기간에 일관된 결과를 얻을 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
감염된 동물을 대상으로 한 실험에서 중요한 단계는 기생충혈증 수치를 조절하는 것입니다. T. evansi의 다른 균주는 마우스에서 다양한 방식으로 작용할 수 있으며, 급성 감염에서 만성 감염으로 이어질 수있습니다 2,4,5,6. 또한, 감염 용량의 변화는 마우스의 생존 시간을 줄이거나 연장할 수 있?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자들은 재정적 지원을 해준 산타 카타리나 주립대학(Santa Catarina State University), 동물과 우주를 위한 약리학 연구소(Pharmacology Laboratory), 그리고 이 실험에 사용된 T. evansi 에 감염된 혈액 샘플을 냉동 보존한 Hemoparasites and Vectors Biochemistry Laboratory에 특별한 감사를 표한다.
Materials
| 26 G 1/2" needle coupled to insulin syringe | TKL | 80288090100 | Used to infund solutions on laboratory animals |
| Accessories for von Frey analgesimeter | INSIGHT | EFF 303 | Containment box with support for digital analgesimeter assessment |
| D-(+)-Glucose | SIGMA-ALDRICH | G7021 | A monosaccharide which is the main source of energy in the form of ATP for living organisms |
| Digital analgesimeter | INSIGHT | von Frey Wi-Fi | The von Frey Wi-Fi is a portable device used to assess tissue sensitivity to mechanical stimuli |
| Gilson type 10 µL polypropylene tip | CRALPLAST | 18261 | Polypropylene to be used on eletronic von Frey apparatus, recommended for hind paw allodynia assessment |
| Laboratory water bath | BEING INSTRUMENT | BW-22P | Used to heat liquid and semi-solid substances contained in appropriate recipients to specific temperature |
| Phosphate buffered saline | SIGMA-ALDRICH | 806552 | A balanced salt solution buffer used for a variety of cell culture applications |
| Swiss mice (Mus musculus) from both gender | UFSC | Swiss Webster | Laboratory animals used for controlled experiments |
| Trypanosoma evansi cryiopreserved sample | UDESC | – | Sample used to infect all mice, ceded by the Hemoparasites and Vectors Biochemistry Laboratory |
| Universal type 10 µL polypropylene tip | CRALPLAST | 18171 | Polypropylene to be used on eletronic von Frey apparatus, recommended for visceral allodynia assessment |
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