Diagnóstico Rápido Baseado na Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa (qPCR) da Infecção por Helicobacter pylori e Resistência a Antibióticos

H. pylori é uma bactéria gram-negativa em forma espiral, altamente móvel, que vive principalmente na região do piloro do estômago¹. É um patógeno comum que infecta cerca de 50% da população mundial². A maioria das pessoas com infecção por H. pylori não tem manifestações clínicas, e a maioria desenvolve diferentes doenças após vários anos de infecção, incluindo gastrite crônica, úlceras pépticas, úlceras gástricas e câncer gástrico³. Em vários estudos baseados em diferentes populações, a eficácia da eliminação do H. pylori na prevenção do câncer de estômago e lesões pré-cancerosas tem sido demonstrada ^4,5. Por isso, a Agência Internacional de Pesquisa em Câncer da Organização Mundial da Saúde (OMS) tem aconselhado a erradicação do H. pylori como medida preventiva⁶.

O uso de métodos não invasivos para identificar a infecção por H. pylori é um componente fundamental do tratamento para a maioria dos indivíduos com dispepsia assintomática. O teste respiratório da ureia (UBT), o teste do antígeno fecal do H. pylori (SAT) e o teste sorológico são técnicas não invasivas populares. Dentre estes, a UBT é o procedimento menos intrusivo e mais preciso disponível. A UBT usa urease, abundantemente presente em H. pylori, para hidrolisar ureia marcada isotopicamente em amônia e dióxido de carbono (13C ou 14C). Em contraste, o ensaio imunocromatográfico (ICA)⁷ é conveniente, simples e não invasivo para amostragem. No entanto, a acurácia do teste é afetada por vários fatores, como a qualidade da amostra de fezes, a temperatura e o intervalo entre a coleta da amostra e o teste. Outro teste baseado na resposta imune é o teste de anticorpos séricos contra H. pylori , que detecta anticorpos no soro do paciente. No entanto, esse teste não é adequado para análise pós-tratamento, uma vez que os anticorpos permanecem por muito tempo após a eliminação da bactéria⁸. Outra grande desvantagem é que esses métodos apenas diagnosticam a infecção por H. pylori e não permitem testes de resistência a drogas para orientar o tratamento baseado na sensibilidade.

Para métodos de teste invasivos, o tecido da biópsia gástrica precisa ser colhido por endoscopia e, em seguida, submetido à histologia, teste rápido da urease e cultura bacteriana. Esses métodos de teste também são muito limitados devido a vários fatores. Atualmente, essas técnicas são limitadas a pacientes idosos, pacientes com alto risco de doença pré-cancerosa ou maligna e pacientes que falharam na terapia de primeira linha para doença do refluxo gastroesofágico ou infecção por H. pylori9. Em segundo lugar, devido às características únicas de crescimento de H. pylori, a taxa de sucesso da cultura bacteriana atinge apenas 50%¹⁰. Assim, os métodos de detecção molecular oferecem uma nova esperança para superar as altas demandas dos métodos de detecção invasivos e orientar o tratamento baseado na sensibilidade. Dentre os métodos de detecção molecular, a PCR quantitativa evoluiu tremendamente nos últimos anos. A qPCR, ao contrário da PCR tradicional, não requer eletroforese em gel e quantifica com precisão o DNA/RNA em amostras adicionando primers e sondas na fase de recozimento. Kits de qPCR para a detecção de infecção por H. pylori e resistência a drogas estão agora disponíveis comercialmente. No entanto, cada método tem suas limitações; Portanto, o diagnóstico clínico e o tratamento de um paciente devem ser considerados em conjunto com seus sintomas, sinais, história, outros exames laboratoriais e resposta ao tratamento.

Atualmente, o principal método de tratamento das infecções por H.pylori é o uso de antibióticos, mas ultimamente, está se tornando cada vez mais difícil tratar essas infecções devido ao aumento da resistência aos antibióticos. Posteriormente, um declínio significativo na eficácia do tratamento do H. pylori foi observado em todo o mundo, tornando a erradicação do H. pylori um importante problema de saúde pública¹¹.

Claritromicina e levofloxacina são os dois antibióticos de amplo espectro usados para tratar infecções causadas por H.pylori, mas vários estudos relataram resistência generalizada contra essas duas drogas em isolados de H.pylori. A2143G, A2142G e A2142C são três das numerosas mutações pontuais encontradas no gene 23S rRNA de 2,9 kb que resultam em resistência à claritromicina, impedindo que o macrolídeo se ligue. Ao mesmo tempo, os loci de mutação do gene de resistência à levofloxacina estão localizados principalmente nos seis sítios de mutação (A260T, C261A, T261G, G271A, G271T, A272G) do gene gyrA ¹². A descoberta desses mecanismos de resistência baseados em mutações genéticas levou a uma mudança gradual na detecção do H. pylori através de estudos de base cultural para testes moleculares.

Em geral, há uma necessidade clínica urgente de um método diagnóstico não invasivo, eficaz e simultâneo para a detecção de infecções por H. pylori e resistência a drogas. Adotamos um teste combinado de cordas e o método qPCR para superar as dificuldades de amostragem e atingir o objetivo de detecção simultânea de infecção por H. pylori e resistência a drogas usando diferentes sondas de primer.