Kuduz IgG ve IgM Antikorlarının Kuduz İndirekt Floresan Antikor Testi Kullanılarak Saptanması
Summary
Bu makalenin amacı, kuduza özgü IgG ve IgM antikorlarının saptanmasında kuduz indirekt floresan antikor testinin kullanımını incelemektir.
Abstract
Kuduz dolaylı floresan antikoru (IFA) testi, serum veya beyin omurilik sıvısında kuduza özgü çeşitli antikor izotiplerini saptamak için geliştirilmiştir. Bu test hızlı sonuçlar sağlar ve birkaç farklı senaryoda kuduz antikorlarını tespit etmek için kullanılabilir. Kuduz IFA testi, kuduz gelişen bir hastada bağışıklık tepkisini değerlendirmek için antikorların hızlı ve erken tespiti için özellikle yararlıdır. Antemortem kuduz teşhisi için diğer yöntemler öncelikli olsa da, bu test antikor tespiti yoluyla yakın zamanda kuduz virüsü maruziyetini göstermek için kullanılabilir. IFA testi, virüs nötralize edici bir antikor (VNA) titresi sağlamaz, ancak maruziyet öncesi profilaksi (PrEP) yanıtı, pozitif veya negatif antikor varlığı ile değerlendirilebilir. Bu test çeşitli durumlarda kullanılabilir ve bir dizi farklı hedef için sonuç sağlayabilir. Bu çalışmada, PrEP alan bireylerden birkaç eşleştirilmiş serum örneği kullandık ve IFA testini kullanarak zaman içinde kuduz antikoru varlığını gösterdik.
Introduction
Kuduz dolaylı floresan antikoru (IFA) testi, serum veya beyin omurilik sıvısında kuduza özgü çeşitli antikor izotiplerini tespit etmek için kullanılır. Bir antemortem kuduz hastasını izlemek için mevcut olan bir dizi testten biridir. Bir hastanın kuduz enfeksiyonuna karşı bağışıklık tepkisini değerlendirmek için antikorların erken tespiti için özellikle yararlıdır. Diğer testler, vaka öyküsü ve hastanın aşı durumu ile birlikte kullanıldığında, IFA testi kuduz virüsüne veya bir aşıya maruz kalmanın belirlenmesine yardımcı olabilir1. IFA testi IgM ve/veya IgG’yi ölçtüğü için, spesifik antikorun değerleri, antijen1’e maruz kalmaktan yaklaşık bir zaman dilimini gösterebilir. Bu test, listelenen uygulamalarda veya henüz keşfedilmemiş diğer uygulamalarda yararlı olabilir.
Birkaç kuduz serolojik tahlili mevcuttur. Hızlı floresan odak inhibisyon testi (RFFIT), floresan antikor virüs nötralizasyonu (FAVN) testi veya bunların modifikasyonları, kuduz virüsü nötralize edici antikorları (RVNA’lar) ölçmek için birincil yöntemlerdir1. Ancak bu testler IgM ve IgG antikorlarını ayırt etmez. Kuduz immün yanıtının izlenmesinde antikor izotipinin ayırt edilmesi önemli olduğunda, kuduz IFA ve kuduz enzimine bağlı immünosorbent testi (ELISA) testleri kullanılır, ancak RVNA’ları ölçmezler. IFA ve ELISA testleri, bir numunede kuduza özgü antikorların varlığını belirlemek için kullanılabilse de, bunların nasıl yürütüldüğü konusunda bazı farklılıklar vardır. IFA testi, antijen substratı olarak hücre kültürü yapılmış bir canlı virüs kullanırken, kuduz tespiti için tipik bir ELISA, viral proteinlerden bir veya daha fazlasını kullanır. Kuduz virüsünün kültürlenebildiği bir laboratuvar ortamında, ELISA için bireysel viral proteinleri satın almak veya yetiştirmek yerine IFA testi daha kolay yapılabilir. Hangisinin seçileceği belirlenirken testin amacı ve herhangi bir kuduz serolojik testinin sonuçlarından elde edilen bilgiler dikkate alınmalıdır2.
IgM ilk yanıt veren kişidir, yaklaşık 28. günde sınıf geçişi gözlenene kadar artar, bu noktada IgG baskın dolaşımdaki antikorhaline gelir 3. Bu nedenle, IgM, kuduz virüsüne veya aşılamaya maruz kaldıktan sonra yalnızca sınırlı bir süre için beklenir. Hem serum hem de beyin omurilik sıvısının (BOS) test edilmesi, maruziyetin antikorların sadece serumlarda görüleceği aşılama yoluyla mı yoksa BOS1’de potansiyel olarak antikorları gösterecek viral bir enfeksiyondan mı olduğunu gösterebilir.
Kuduz antikorlarının maruziyet öncesi profilaksiden (PrEP) sonra birkaç yıl devam ettiği tespit edilmiştir4. IFA testi, aşılama veya maruziyeti takiben farklı zaman noktalarında bunu göstermek için yararlı bir araç olabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
IFA testi, bir etiketleme bölgesinin kuduza özgü antikorları görselleştirmesine izin veren bir antijen-antikor kompleksinden yararlanır. Nöroblastom veya BHK hücreleri, çok kuyulu PTFE kaplı mikroskop lamları üzerine ekilir ve kuduz virüsü laboratuvar suşu CVS-11 ile aşılanır. Tek tabaka birleştiğinde ve hücreler yaklaşık% 50’lik istenen enfektiviteye ulaştığında, slaytlar kullanıma hazır olana kadar saklanır6.
Hasta serumu veya BOS, enfek…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu projeyi desteklediği için New York Eyaleti Sağlık Bakanlığı Wadsworth Merkezi’ne minnettarız.
Materials
| 25x55mm glass cover slips | Any | ||
| Acetone | Any | ||
| Anti-Human IgG Labeled Conjugate | Sigma-Aldrich | F9512 | |
| Anti-Human IgM Labeled Conjugate | SeraCare | 5230-0286 | |
| Aspirating pipette tip | Any | ||
| BHK-21 Cells | ATCC | CCL-10 | |
| BION IFA Diluent | MBL BION | DIL-9993 | |
| Cell Culture water | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Coplin Jars | Any | ||
| Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| Fluorescent microscope with FITC filter | Any | ||
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
| Gullsorb IgM inactivation reagent | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG Inactivation Reagent |
| L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| Mouse Neuroblastoma Cells | ATCC | CCL-131 | |
| Multi-well Teflon coating glass slides | Any | ||
| PBS | Any | pH 7.6 | |
| Penicillin | Sigma | P-3032 | EGM |
| Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate | Millipore Sigma | 5100, 5500 or 6500 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
| Sodium Chloride crystals | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
| Sterile dropper | Any | ||
| Streptomycin sulfate salt | Sigma | S9137 | EGM |
| Trizma pre-set crystals pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
| Tryptose Phosphate Broth | BD | 260300 | EGM |
| Vitamin mix | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
References
- Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1. World Health Organization. , 232-245 (2018).
- Moore, S. M. Challenges of rabies serology: defining context of interpretation. Viruses. 13 (8), 1516 (2021).
- Zajac, M. D. Development and evaluation of a rabies enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) targeting IgM and IgG in human sera. Viruses. , 40-49 (2019).
- Mills, D. J., Lau, C. L., Mills, C., Furuya-Kanamori, L. Long-term persistence of antibodies and boostability after rabies intradermal pre-exposure prophylaxis. Journal of Travel Medicine. 29 (2), (2022).
- Ramakrishnan, M. A. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World Journal of Virology. 5 (2), 85-86 (2016).
- Rudd, R. J., Appler, K. A., Wong, S. J. Presence of cross-reactions with other viral encephalitides in the indirect fluorescent-antibody test for diagnosis of rabies. Journal of Clinical Microbiology. 51 (12), 4079-4082 (2013).
- Fooks, A. R., Jackson, A. C. . Rabies: scientific basis of the disease and its management. , (2020).
- Paldanius, M., Bloigu, A., Leinonen, M., Saikku, P. Measurement of Chlamydia pneumoniae-specific immunoglobulin A (IgA) antibodies by the microimmunofluorescence (MIF) method: comparison of seven fluorescein-labeled anti-human IgA conjugates in an in-house MIF test using one commercial MIF and one enzyme immunoassay kit. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 10 (1), 8-12 (2003).
- Rodriguez, M. C., Fontana, D., Garay, E., Prieto, C. Detection and quantification of anti-rabies glycoprotein antibodies: current state and perspectives. Applied Microbiology and Biotechnology. 105 (18), 6547-6557 (2021).
- Katz, I. S. S., Guedes, F., Fernandes, E. R., Dos Ramos Silva, S. Immunological aspects of rabies: a literature review. Archives of Virology. 162 (1), 3251-3268 (2017).
- Moore, S. M., Hanlon, C. A. Rabies-specific antibodies: measuring surrogates of protection against a fatal disease. PLoS Neglected Tropical Diseases. 4 (3), 595 (2010).
