Lepidopteran insekter representerer mer enn 10% av alle beskrevne levende arter¹, og visse taxa arter forårsaker alvorlig skade på planter og alvorlige landbrukstap ^2,3. Selv om molekylære og genetiske studier er utviklet ved hjelp av modellinsekter som silkeorm bombyx mori ^4,5, forblir skadedyrsinsekter uinvestert, delvis på grunn av vanskelighetene med oppdrett og håndtering^{av 6,7}. Derfor er grunnleggende studier og teknikker nødvendige for å forstå biologien til slike ikke-modell skadedyrsinsekter.

Tortricidae (Lepidoptera), kjent som tortrix eller leafroller møll, består av mange landbruks- og skogbruk skadedyr⁸. Av insekt taxa er orientalsk te tortrix Homona magnanima Diakonoff og sommerfrukt tortrix Adoxophyes honmai Yasuda alvorlige polyfagiske kjent for å skade tetrær i Øst-Asia⁷. De to artene lå flate og ovale skalalignende eggklynger (eller eggmasser) bestående av tynne, myke og skjøre egg dekket av mors sekreter. Selv om embryogenesestadier er avgjørende for insektutvikling og kjønnsbestemmelse⁹, forhindrer eggstrukturer videre analyse fra å forstå insektens biologi. Det er viktig å overvinne vanskelighetene for videre studier på som ovipositing slike komplekse eggmasse.

Her, for å forstå biologien til tortricids, er metoder for masseoppdrett, observasjoner og molekylære studier utviklet ved hjelp av A. honmai og H. magnanima. For det første opprettholder masseoppdrettsmetoder begge tortricids over 100 generasjoner av innavl. Separasjonen av egg fra den sammenkoblede skalalignende eggmassen forenklet embryogeneseobservasjon av tortricidene ved hjelp av alkaliske og organiske løsningsmidler som tidligere ble utviklet fra teknikker som brukes i fluer¹⁰. I tillegg etablerte den nåværende studien kjønnsdiskriminering av små embryoer ved å utvikle fargingsmetoder for kjønnskromatin hos lepidopteran kvinner ved hjelp av melke-eddik-orcein¹¹. Ved å kombinere disse metodene ble nukleinsyrer av høy kvalitet og kvantitet ekstrahert fra kjønnsbestemte embryoer, noe som ellers var vanskelig å etablere⁶. Den ekstraherte RNA ble brukt til neste generasjons sekvensering. Samlet gjelder metodene som presenteres her for andre lepidopteran insekter og andre insekt taxa.