将DNA微注射到异种胚胎的眼蕾中，以及GFP表达光学轴状轴向轴向的成像，活的Xenopus大白鼠

在神经系统发育过程中，前突触神经元的斧子通过大脑的不同区域导航，到达目标区域。当斧突子侵入其目标组织时，它们与午睡后目标神经元建立突触连接。在许多类型的神经元中，轴突通过阐述终端分支或^轴1的网络来增加它们可以建立突触连接的数量和空间范围。水生蛙Xenopus laevis的胸腔-tec-tect-tecta是一个强大的脊椎动物模型，用于检查终端轴突化和突触^{连接2、3、4}的原理。.单个GFP表达光学轴状轴向与正常和改变的分子信号可以直接观察到在完整，活的Xenopus小动物5，6，7，8。为了单独表达GFP，或与少量视神经中全长或截断基因一起表达基因，我们使用一种技术，将DNA微注射/脂肪插入一天长Xenopus^胚胎9的眼蕾^中。10.这项技术最初是为研究幼代黄鼠狼的视性斧头路径发现机制而开发的，此后我们和其他人一直应用来确定视斧头背后的细胞自主分子机制在Xenopus的植树^{5，6，7，8，9，10}。

其他模型物种以及X.laevis中已经发展了在少数光学神经元中表达外源基因的替代技术。然而，与在异种胚胎眼蕾中微注射DNA/利普菲试剂相比，这些方法中的每一个都带来了挑战和限制。在小鼠中，转基因可用于表达少数视神经中的基因，但转基因小鼠的生成成本高昂且耗时，转基因小鼠往往存在不良^{的副作用11。}在视神经中表达外源基因的转基因斑马鱼也可以通过将质粒注射到早期裂解阶段^胚胎12中产生。然而，这个过程需要克隆一个特定的启动子来表达在斑马鱼幼^虫12的视神经的马赛克模式的基因。转基因斑马鱼视神经中外源DNA的表达频率也较低（<30%）与用DNA/脂质体试剂（30~60%）进行微注射的Xenopus小黄鼠^{相比，12。}在ovo电穿孔也被用来表达基因在少量的光学神经元在^小鸡13。然而，这个程序未能完全描述建立光学投影的机制，因为光学轴向轴向化不能在完整、活的小鸡胚胎中成像。最后，几个实验室已经利用电穿孔将基因转染成少量的视神经，在Xenopus ^14，15。然而，电穿孔需要优化设备和方案（刺激器、电极、波脉冲的空间和时间模式），而用于将DNA/利普菲试剂微注射到Xenopus胚胎眼蕾中。

我们和其他人以前使用微注射/脂肪技术将DNA注入到Xenopus胚胎的眼蕾中，以确定细胞自主信号机制，建立视轴向^{化5，6，7,8.}我们最初用这种方法来剖析在异种小^球5、6的视轴向化中，Cadherin和Wnt适配器蛋白β-卡泰宁的功能。在一项研究中，我们表明，β-卡腾宁结合到β-卡腾宁和PDZ分别需要启动和^{塑造体内的}视轴非子树。在第二份报告中，我们演示了β-卡泰宁和葛兰素-3+的β-卡泰宁结合域对腹腔光学轴向6的投影模式进行了反向^调节。最近，我们确定了Wnt因子，腺瘤大肠杆菌（APC）的作用，在调节在Xenopus小^虫7的视轴状树的形态特征。通过共同表达APC的N-终端和中心域，在单个光神经元中与GFP一起调节β-卡泰宁稳定性和微管组织，我们确定了这些APC交互域在分支编号上的共享和不同作用，长度，和角度在光学轴向轴向在^体内7。另一个实验室使用显微注射/利福菲化技术来确定BDNF受体TrkB在Xenopus 8的光学轴状轴状中发出信号的细胞自主^作用。该组显示，在^体内8的个体光学轴突合中，显性阴性TrkB扰动分枝和突触成熟。总体而言，Xenopus的脂质化技术已经阐明了不同基因在原生环境中视斧子分枝中的具体作用。