Стандартная операционная процедура для lyssavirus наблюдение за популяцией летучих мышей на Тайване
Summary
Этот протокол вводит стандартную лабораторную процедуру для диагностического тестирования лиссавирусных антигенов у летучих мышей на Тайване.
Abstract
Вирусы в пределах рода Lyssavirus являются зоонозными патогенами, и по крайней мере семь видов лиссавирусов связаны с случаями заболевания человека. Поскольку летучие мыши являются естественными резервуарами большинства лиссавирусов, программа наблюдения за лиссавирусами летучих мышей проводится на Тайване с 2008 года, чтобы понять экологию этих вирусов у летучих мышей. В рамках этой программы неправительственные организации по сохранению летучих мышей и местные центры по борьбе с болезнями животных сотрудничали в сборе мертвых летучих мышей или летучих мышей, умирающих от слабости или болезни. Мозг ткани летучих мышей были получены через некропсию и подвергаются прямому флуоресцентному тесту на антитела (FAT) и обратной транскрипции полимеразной цепной реакции (RT-PCR) для обнаружения лиссавирусных антигенов и нуклеиновых кислот. Для FAT, по крайней мере два различных диагноза бешенства conjugates рекомендуется. Для RT-PCR для усиления частичной последовательности гена нуклеопротеина (JW12/N165-146, N113F/N304R) используются два набора грунтовок. Эта программа наблюдения отслеживает лиссавирусы и другие зоонозные агенты у летучих мышей. Тайваньский лиссавирус летучей мыши обнаружен в двух случаях японского пипитштила(Pipistrellus abramus)в 2016-2017 годах. Эти выводы должны информировать общественность, специалистов в области здравоохранения и ученых о потенциальных рисках контакта с летучими мышами и другими дикими животными.
Introduction
Вирусы в пределах рода Lyssavirus являются зоонозными патогенами. Есть по крайней мере семь видов лиссавирусов, связанных с человеческими случаями1. В дополнение к 16 видов в этом роду1,2,3, Тайвань летучая мышь lyssavirus (TWBLV)4 и Kotalahti летучая мышь lyssavirus5 были недавно определены в летучих мышей, но их таксономические статусы до сих пор быть определены.
Летучие мыши являются естественными хозяевами большинства лиссавирусов, за исключением лиссавируса Mokola и лиссавируса Икома,которые до сих пор не выявлены ни у одной летучей мыши 1,2,3,6. Информация о лиссавирусах у азиатских летучих мышей по-прежнему ограничена. Два нехарактерных лиссавирусов у азиатских летучих мышей (один в Индии, а другой в Таиланде)7,8 были зарегистрированы. Один случай бешенства человека, связанный с укусом летучей мыши в Китае, был зарегистрирован в 2002 году, но диагноз был поставлен только путем клинического наблюдения9. В Центральной Азии, Араван лиссавирус был выявлен в меньшей мыши ушастый летучая мышь (Myotis blythi) в Кыргызстане в 1991 году, и Худжанд лиссавирус был выявлен в усатые летучая мышь (Myotis mystacinus) в Таджикистане в 2001году 10. В южной Азии, Gannoruwa летучая мышь лиссавирус был выявлен в индийской летучей лисы(Pteropus medius) в Шри-Ланке в 20153. В юго-восточной Азии, несколько серологических исследований на летучих мышей на Филиппинах, Таиланде, Бангладеш, Камбодже и Вьетнаме показали переменную серораспространенность11,12,13,14, 15. Хотя иркутский лизсавирус был выявлен в большей трубчатой летучей мыши(Murina leucogaster) в провинции Цзилинь, Китай в 2012 году16, точные виды и места лизавирусов в восточноазиатских популяциях летучих мышей остаются неизвестными.
Для оценки присутствия лиссавируса в популяциях тайваньских летучих мышей была начата программа эпиднадзора, в рамках которой использовались как прямые FAT, так и RT-PCR. Тайваньский лиссавирус летучей мыши был выявлен в двух случаях японского pipistrelle(Pipistrellus abramus)4 в 2016-2017 годах. В настоящей статье вводится лабораторная стандартная процедура эксплуатации для лиссавирусного наблюдения за популяцией летучих мышей на Тайване. Диаграмма потока лиссавирусной диагностики летучих мышей в нашей лаборатории представлена на рисунке 1.
Protocol
Representative Results
Discussion
Эта лабораторная стандартная операционная процедура (SOP) обеспечивает серийный процесс для тестирования образцов летучих мышей на наличие лиссавирусных антигенов на Тайване. Ключевыми шагами являются занятость FAT и RT-PCR. Важное значение имеет также выбор подходящих образцов и успешна?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим Тянь-Чэн Ли, И-Тан Глин, Чиа-Чжун Цай и Я-Лан Ли за помощь в этом исследовании. Это исследование было поддержано грантом No 107AS-8.7.1-B’B2 (1) от Бюро инспекции здоровья животных и растений и карантина, Совета по сельскому хозяйству, Исполнительный юань, Тайвань.
Materials
| 2.5% Trypsin (10x) | Gibco | 15090046 | Trppsin |
| 25 cm2 flask | Greiner bio-one | 690160 | |
| Acetone | Honeywell | 32201-1L | |
| Agarose I | VWR Life Science | 97062-250 | |
| Alcohol | NIHON SHIYAKU REAGENT | NS-32294 | |
| AMV Reverse Transcriptase | Promega | M5101 | |
| Antibiotic-Antimycotic(100X) | Gibco | 15240-062 | MEM-10 |
| Blade | Braun | BA215 | |
| Centrifuge | eppendorf | 5424R | |
| Chemilumineance system | TOP BIO CO. | MGIS-21-C2-1M | |
| Collection tube | Qiagen | 990381 | |
| Collection tube | SSI | 2341-SO | |
| Cover slide | Muto Pure chemical Co., LTD. | 24505 | |
| DNA analyzer | Applied Biosystems | 3700XL | |
| Fetal bovine serum | Gibco | 10437028 | MEM-10 |
| FITC Anti-Rabies Monoclonal Globulin | Fujirebio Diagnostic Inc. | 800-092 | FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent B |
| Four-well Teflon-coating glass slide | Thermo Fisher Scientific | 30-86H-WHITE | |
| Gel Electrophoresis System | Major Science | MJ-105-R | |
| HBSS (1x) | Gibco | 14175095 | Trppsin |
| Incubator | ASTEC | SCA-165DS | |
| Inverted Microscope | Olympus | IX71 | |
| L-Glutamine 200 mM (100x) | Gibco | A2916801 | MEM-10 |
| LIGHT DIAGNOSTICS Rabies FAT reagent | EMD Millipore Corporation | 5100 | FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent A |
| MagNA Pure Compact Instrument | Roche | 03731146001 | |
| MagNA Pure Compact NA Isolation Kit 1 | Roche | 03730964001 | |
| MEM (10x) | Gibco | 11430030 | MEM-10 |
| MEM NEAA (100x) | Gibco | 11140050 | MEM-10 |
| MEM vitamin solution | Gibco | 11120052 | MEM-10 |
| NaHCO3 | Merck | 1.06329.0500 | MEM-10 |
| Needle | Terumo | NN*2332R9 | |
| PBS | Medicago | 09-8912-100 | |
| Primer synthesis | Mission Biotech | ||
| RNasin ribonuclease inhibitor | Promega | N2111 | |
| Sequencing service | Mission Biotech | ||
| Slide | Thermo Scientific | AA00008032E00MNT10 | |
| Sodium Pyruvate (100 mM) | Gibco | 11360070 | MEM-10 |
| Stainless Steel Beads | QIAGEN | 69989 | |
| Sterile absorbent pad | 3M | 1604T-2 | |
| Syringe filter | Nalgene | 171-0045 | |
| Taq polymerase | JMR Holdings | JMR-801 | |
| Thermal cycler | Applied Biosystems | 2720 | |
| TissueLyser II | QIAGEN | 85300 | |
| Tongue depressor | HONJER CO., LTD. | 122246 | |
| Tweezer | Tennyson medical Instrument developing CO., LTD. | A0601 | |
| Tylosin Tartrate | Sigma | T6271-10G | MEM-10 |
References
- Kuzmin, I. V., Rupprecht, C. E., Nagarajan, T. Basic facts about lyssavirus. Current laboratory techniques in rabies diagnosis, research, and prevention, volume 1. , 3-21 (2014).
- Aréchiga Ceballos, N., et al. Novel lyssavirus in bat, Spain. Emerging Infectious Diseases. 19 (5), 793-795 (2013).
- Gunawardena, P. S., et al. Lyssavirus in Indian Flying Foxes, Sri Lanka. Emerging Infectious Diseases. 22 (8), 1456-1459 (2016).
- Hu, S. C., et al. Lyssavirus in Japanese Pipistrelle, Taiwan. Emerging Infectious Diseases. 24 (4), 782-785 (2018).
- Nokireki, T., Tammiranta, N., Kokkonen, U. -. M., Kantala, T., Gadd, T. Tentative novel lyssavirus in a bat in Finland. Transboundary Emerging Diseases. 65 (3), 593-596 (2018).
- Banyard, A. C., Evans, J. S., Luo, T. R., Fooks, A. R. Lyssaviruses and bats: emergence and zoonotic threat. Viruses. 6 (8), 2974-2990 (2014).
- Pal, S. R., et al. Rabies virus infection of a flying fox bat, Pteropus policephalus in Chandigarh, Northern India. Tropical and Geographical Medicine. 32 (3), 265-267 (1980).
- Smith, P. C., Lawhaswasdi, K., Vick, W. E., Stanton, J. S. Isolation of rabies virus from fruit bats in Thailand. Nature. 216 (5113), 384 (1967).
- Tang, X. Pivotal role of dogs in rabies transmission, China. Emerging Infectious Diseases. 11 (12), 1970-1972 (2005).
- Kuzmin, I. V., et al. Bat lyssaviruses (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences. Virus Research. 97 (2), 65-79 (2003).
- Arguin, P. M., et al. Serologic evidence of Lyssavirus infections among bats, the Philippines. Emerging Infectious Diseases. 8 (3), 258-262 (2002).
- Lumlertdacha, B., et al. Survey for bat lyssaviruses, Thailand. Emerging Infectious Diseases. 11 (2), 232-236 (2005).
- Kuzmin, I. V., et al. Lyssavirus surveillance in bats, Bangladesh. Emerging Infectious Diseases. 12 (3), 486-488 (2006).
- Reynes, J. -. M., et al. Serologic evidence of lyssavirus infection in bats, Cambodia. Emerging Infectious Diseases. 10 (12), 2231-2234 (2004).
- Nguyen, A. T., et al. Bat lyssaviruses, northern Vietnam. Emerging Infectious Diseases. 20 (1), 161-163 (2014).
- Liu, Y., Zhang, S., Zhao, J., Zhang, F., Hu, R. Isolation of Irkut virus from a Murina leucogaster bat in China. PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (3), 2097 (2013).
- Kaplan, M. M., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Kiprowski, H. Safety precautions in handling rabies virus. Laboratory Techniques in Rabies, 4th Ed. , 3-8 (1996).
- Smith, I., Wang, L. F. Bats and their virome: an important source of emerging viruses capable of infecting humans. Current Opinion in Virology. 3 (1), 84-91 (2013).
- Corbet, G. B., Hill, J. E. . The mammals of the Indomalayan region: a systematic review. , (1992).
- Mayer, F., von Helversen, O. Cryptic diversity in European bats. Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 268 (1478), 1825-1832 (2001).
- Epstein, J. H., Field, H. E., Wang, L. F., Cowled, C. Anthropogenic epidemics: the ecology of bat-borne viruses and our role in their emergence. Bats and viruses: a new frontier of emerging infectious diseases. , 249-280 (2016).
- . Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing Available from: https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf (2019)
- Hayman, D. T. S., et al. A universal real-time assay for the detection of Lyssaviruses. Journal of Virological Methods. 177 (1), 87-93 (2011).
- Franka, R., et al. A new phylogenetic lineage of rabies virus associated with western pipistrelle bats (Pipistrellus hesperus). Journal of General Virology. 87 (8), 2309-2321 (2006).
- Trimarchi, C. V., Smith, J. S., Press, A., Jackson, A. C., Wunner, W. H. Diagnostic evaluation. Rabies, 1st ed. , 307-349 (2002).
- Moldal, T., et al. First detection of European bat lyssavirus type 2 (EBLV-2) in Norway. BMC Veterinary Research. 13, 216 (2017).
- Robardet, E., et al. Comparative assay of fluorescent antibody test results among twelve European National Reference Laboratories using various anti-rabies conjugates. Journal of Virological Methods. 191 (1), 88-94 (2013).
- Hanlon, C. A., Nadin-Davis, S. A., Jackson, A. C. Laboratory diagnosis of rabies. Rabies, 3rd ed. , 409-459 (2013).
- Fischer, M., et al. A step forward in molecular diagnostics of lyssaviruses–results of a ring trial among European laboratories. PLoS ONE. 8 (3), 58372 (2013).
- David, D., et al. Rabies virus detection by RT-PCR in decomposed naturally infected brains. Veterinary Microbiology. 87 (2), 111-118 (2002).
- Robardet, E., Picard-Meyer, E., Andrieu, S., Servat, A., Cliquet, F. International interlaboratory trials on rabies diagnosis: an overview of results and variation in reference diagnosis techniques (fluorescent antibody test, rabies tissue culture infection test, mouse inoculation test) and molecular biology techniques. Journal of Virological Methods. 177 (1), 15-25 (2011).
