在小鼠中纳入可存活的肝脏活检程序评估非酒精性脂肪性肝炎 (NASH) 的解决方法

所有体内实验都是根据 MedImmune 机构动物护理和使用委员会 (IACUC) 的政策进行的, 并符合《实验动物护理和使用指南》第8版 (2011年)。雄性 C57BL6J 小鼠被放置在高脂肪、高果糖、高胆固醇的 AMLN 饮食中。在开始药物干预前 3周, 在饮食26周后进行肝脏活检。 1. 获得和准备手术材料 高压灭菌器 (小尖剪刀、钝尖钳、棉签、纱布方块、7毫米订书夹和订书机)。 获得关闭腹壁的无菌缝合线 (5-0 涂层可吸收缝合线与 PC-1 针是合适的), 可吸收的明胶压缩海绵 (用于止血目的), 无菌窗帘和手套, 碘基擦洗和70% 乙醇 swabsabs/湿巾, 丁丙诺非 (每只小鼠 0.05-0.1 mg/kg 剂量; 每只小鼠至少3剂) 和手术眼肌动/润滑。 用异氟醚填充, 为麻醉准备蒸发器。 打开珠子灭菌器, 以便在动物之间快速进行仪器灭菌。 打开加热面或加热垫, 用于动物回收。 适当的个人防护设备 (如面膜、长袍、头罩、手套)。 2. 手术前准备 将鼠标放入具有2-3% 异氟烷流动的感应室中生效。 观察小鼠, 直到缺乏对脚趾捏的反应, 确认麻醉的深度是适当的。 使用眼药膏, 以防止与麻醉相关的角膜干燥。 皮下药丁酮非诺芬 (0.05-0.1 mg/kg)。 用动物钳立即将手术部位的过程倒出。 剃须后, 将鼠标移动到加热表面 (37°c)。放置鼠标在这样的方式, 使背表面向下, 腹部暴露。将小鼠的鼻子插入麻醉鼻锥, 以促进在2-3% 的流速下传递异氟醚。 用 betadine 和70% 乙醇的交替棉签清洁手术部位 (3次)。 打开并设置无菌手术器械。 取下手套, 更换无菌手术手套。 3. 手术程序 用剪刀做一个纵向切口 (1-2 厘米), 立即尾状的过程, 稍微到老鼠的左侧, 在腹部皮肤。 钝器用钳子和剪刀解剖皮肤远离腹壁。 暴露腹壁, 想象下面的肝脏。 使用无菌手术刀刀片在腹壁做一个切口 (1-2 厘米), 以显示肝脏的左外侧叶 (LLL)。请注意:在整个研究过程中保持一致。其他常见的兴趣叶是右内侧叶 (RML) 和左内侧叶 (爱我的生活)。 通过切口使左外侧叶外部化。 选项 1: 用拇指和食指轻轻按摩腹部, 露出 LLL 的一部分。 选项 2: 将无菌棉签放置在 LLL 下方, 轻轻拉出一部分以暴露。 在 LLL 下面放置一块不育的盐水浸透的纱布, 让肝脏有一个无菌和水合的表面。 用无菌剪刀从 LLL 切出一块楔形的肝脏。请注意:被切除的肝脏的大约大小是30-50 毫克 (& lt;5% 的肝脏在小鼠)。 切一块与肝脏楔块大小相似的明胶海绵。用钳子将海绵插入肝脏的切割部分。 用钳子固定海绵, 保持与肝脏的接触, 直到它粘附在肝脏表面, 止血。 将肝脏活检片放入适当的试管 (即冷冻、固定等)。 轻轻地将肝脏放回腹腔, 注意不要打扰海绵。 用5-0 涂层可吸收缝合线缝合腹壁, 开始和结束时有一个完整的正方形结。 用7毫米伤口夹 (或订书针) 关闭皮肤。 检查伤口夹, 确保切口完全闭合。 将鼠标从鼻锥中取出, 放入加热表面的干净保持架中。 将仪器放入小鼠之间的珠子灭菌器中, 在放置玻璃珠消毒器之前, 请确保所有有机物质都应使用无菌盐水从仪器中取出。 4. 术后护理 监视鼠标, 直到它恢复意识, 并可以权利自己。 记录术后观察, 并每天检查小鼠的裂开。 术后6-8 和手术后 24小时, 在皮下再次服用第二和第三剂丁丙诺非 (0.05-0.1 mg/kg)。 术后7-10 取出伤口夹。