非アルコール性脂肪性肝炎 (NASH) の解像度を評価するためにマウスで存続可能肝生検の手順の定款

すべての生体実験をケアと第 8 版 (2011) 実験動物の使用のため機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) MedImmune、LLC とガイドとの契約の方針に基づき行った。男性の C57BL6J マウスは、高脂肪、高果糖液糖、高コレステロール AMLN ダイエットに置かれました。26 週間の食事療法の薬理学的介入の開始前に 3 週間後肝生検を行った。 1. 取得および手術材料の準備 オートクレーブ滅菌器 (先のとがった先端のハサミ、鈍い先端の鉗子、綿棒、ガーゼの正方形、7 mm ステープル/傷クリップ、ホッチキス)。 滅菌縫合閉鎖を腹壁 (5-0 被覆 PC 1 針縫合は適した)、(止血目的に使用) に圧縮された吸収性ゼラチン スポンジ、滅菌ドレープ、手袋、ヨウ素系のスクラブと 70% エタノール綿棒/ワイプを入手します。、ブプレノルフィン (0.05 0.1 mg/kg マウスあたり; マウスあたり少なくとも 3 用量) と手術眼軟膏/潤滑。 充填とイソフルレン麻酔の気化器を準備します。 動物との間の迅速な機器の滅菌用のビーズ殺菌装置を入れます。 地球温暖化の表面または加熱パッド、動物の回復に使用するオンにします。 ドン適切な個人用保護具 (PPE) (すなわち、マスク、ガウン、髪ボンネット、手袋)。 2. 術前準備 効果が 2-3% イソフルラン流誘導チャンバーにマウスを配置します。 つま先ピンチに反応の欠如は、麻酔の深さが適切なを確認するまでは、マウスを観察します。 麻酔に関連付けられている角膜の乾燥を防ぐためには、眼軟膏を使用します。 皮下ブプレノルフィンを管理 (0.05 0.1 mg/kg)。 動物クリッパーズを使用して剣状突起の尾側すぐに手術部位を剃る。 手術部位を髭剃り後に加熱された表面 (37 ° C) にマウスを移動します。背側表面下方と腹部が公開されるように、このような方法でマウスを配置します。2-3% の流量にイソフルランの配信を容易にする麻酔鼻の円錐形にマウスの鼻を挿入します。 きれい betadine と 70% のエタノールの交互の綿棒と手術部位 (3 回)。 開き、滅菌手術機器をセットアップします。 手袋を外すし、滅菌手術用手袋に置き換えます。 3. 手術の手順 はさみ (1 ~ 2 cm)、剣状突起とマウスの左側には、腹部の皮膚にわずかにすぐに尾の縦切開を確認します。 鈍鉗子、はさみを使用して腹壁から肌を分析します。 腹壁を公開し、下に肝臓を視覚化します。 腹部壁の生殖不能のメス刃を切開 (1 ~ 2 cm) を使用して、肝左外側葉 (LLL) を可視化します。注:研究を通して一貫しています。興味の他の一般的な葉、右内側葉 (RML) と内側左葉 (私の人生を愛する)。 切開して左葉外側を外部化します。 オプション 1: は、親指と人差し指、LLL の一部を公開すると腹部を軽くマッサージします。 オプション 2: 場所を部分をそっと抜く LLL の下に滅菌綿棒を公開します。 肝臓の上に横に生殖不能および水和の表面をように LLL の下にガーゼの滅菌生理食塩水に浸したの作品を配置します。 滅菌ハサミで 2 つのカットを行い、LLL から肝臓のくさび状の部分をカットします。注:削除されている肝臓のおおよそのサイズは 30-50 mg (< マウスにおける肝臓の 5%)。 肝臓のくさびの部分にサイズで類似したゼラチン スポンジの部分をカットします。鉗子を用いた肝臓の切口の部分にスポンジを挿入します。 場所にスポンジを鉗子押しまで肝臓の表面に付着した、止血、肝臓との接触を維持します。 場所適切なチューブに肝生検部分 (すなわち、冷凍固定液等。)。 スポンジを邪魔しないように世話、腹腔内に肝臓をそっと置きます。 5-0 コーティング縫合による正方形の結び目で開始および終了と腹壁を縫合します。 7 mm 傷クリップ (またはホッチキス) 皮膚を閉じます。 切開部を完全に閉鎖されるように傷クリップを確認します。 鼻の円錐形からマウスを削除し、加熱面にきれいなケージに配置します。 10-20 s. マウスの間にビーズ滅菌に場所機器ガラス ビーズ滅菌器で配置される前に滅菌生理食塩水を用いて楽器からすべての有機材料を削除することを確認します。 4. 手術後のケア それは意識を取り戻すし、自体を右することができますまでは、マウスを監視します。 術後観察を記録し、裂開のために毎日マウスを確認します。 ブプレノルフィンの 2 番目と 3 番目に投与 (0.05 0.1 mg/kg) 皮下 6 ~ 8 h 手術後、もう一度 24 時間後手術。 7-10 日後手術で傷のクリップを取り外します。