استخراج وتحليل للتايوانيين دنج الأخضر
Summary
نقدم بروتوكول لاستخدام الإيثانول كمذيب لاستخراج وتميز التايوانية دنج الأخضر الذي يسلك النشاط المضاد للبكتيريا.
Abstract
دنج الأخضر التايوانية غنية في الفلافونويدات برينيلاتيد ومعارض طائفة واسعة من الأنشطة البيولوجية، مثل مضادات الأكسدة، مضاد للجراثيم، ومنها السرطان. أن المركبات النشطة بيولوجيا من دنج الأخضر التايوانية بروبولينس، إلا وهي جيم ودال، وواو، وزاي تركيز بروبولينس في دنج الأخضر التايوانية تختلف حسب الموسم والموقع الجغرافي. وهكذا، من المهم لوضع إجراءات موحدة وقابلة للتكرار لتحديد نوعية دنج الأخضر التايوانية. نقدم هنا، هو بروتوكول يستخدم كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء، المستندة إلى الإيثانول استخراج وتحليل نشاط المضاد للبكتيريا لتوصيف نوعية دنج الأخضر التايوانية. هذا الأسلوب يشير إلى أن استخراج الإيثانول 95% و 99.5% تحقيق محصول المادة الجافة كحد أقصى من التايوانيين دنج الأخضر، مما تسفر عن تركيزات أعلى من بروبولينس التي لها خصائص مضادة للجراثيم. ووفقا لهذه النتائج، يعتبر هذا البروتوكول يمكن الاعتماد عليها وقابلة للتكرار لتحديد نوعية دنج الأخضر التايوانية.
Introduction
دنج خليط راتنجية طبيعية التي تنتجها أنواع النحل Apis mellifera. دنج قد استخدمت على نطاق واسع منذ العصور القديمة في الأدوية الشعبية. وأفادت دراسة مؤخرا أن دنج مفيد للوقاية من العدوى الميكروبية والالتهاب1. وقد أثبتت دراسات عديدة أن المركبات الحيوية النشطة الرئيسية في دنج هي الفلافونويد، استرات الأحماض الفينولية، برينيلاتيد فكوماريك الأحماض والأحماض ديتيربينيك2،3. وحتى الآن، تم تحديد 10 مشتقات فلافانوني برينيلاتيد من دنج الأخضر التايوانية من خلال كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء ([هبلك])4،5،،من67. هي الأكثر وفرة من بين هذه بروبولينس جيم ودال، واو، وزاي5،7. آثار دنج الأخضر التايوانية بيولوجية كبيرة ترتبط بمحتواه العالي من بروبولينس8.
تركيزات المركبات النشطة بيولوجيا في دنج تختلف اختلافاً كبيرا تبعاً للموسم والموقع الجغرافي التي يتم الحصول عليها في دنج. ويتضمن دنج الأوروبية أساسا الفلافونويد aglycone والفينوليه الأحماض9. المركبات الحيوية النشطة الرئيسية في دنج من البرازيل هي برينيلاتيد فكوماريك الأحماض، مثل artepillin جيم10. أظهرت دراسة أن هذا الموسم عامل حاسم لتحديد المحتوى الإجمالي بروبولين في دنج الأخضر التايوانية11. المحتوى بروبولين في دنج الأخضر التايوانية أعلى في الصيف (أيار/مايو-تموز/يوليه)، وأدنى في فصل الشتاء11. خاصية مضادة للجراثيم دنج اعتبرت على نطاق واسع أن يكون مؤشرا على النشاط البيولوجي. وبصفة عامة، أظهرت عينات دنج جمعت من مختلف مناطق خاصية المضادة للبكتيريا مماثلة؛ على سبيل المثال، وهي عموما فعالة ضد تقريبا جميع البكتيريا إيجابية ويسلك تأثير محدود للبكتيريا ضد البكتيريا سلبية الغرام10،،من1213. التفاعلات التآزر بين الفلافونويدات في دنج أظهرت أن تأثير البكتيريا14. وبالمثل، أبلغ دنج الأخضر التايوانية ليكون لها تأثير مضادات الميكروبات ضد البكتيريا إيجابية15. وعلاوة على ذلك، كما حددت دراسة تأثير مضادات الميكروبات من التفاعلات بين بروبولينس في دنج الأخضر التايوانية8.
من الصعب وصف المركبات النشطة بيولوجيا في دنج نظراً لتكوينها الكيميائي يمكن أن تختلف وفقا لمصدرها الأصلي. ولذلك، من الضروري وضع طريقة مجدية وقابلة للتكرار لتحديد نوعية دنج الأخضر التايوانية. ومع ذلك، أنشئ لا الإجراء القياسي لاستخراج دنج الأخضر التايوانية والتحليل الوظيفي اللاحقة. واقترحت عدة طرق مختلفة تطبيق المذيبات العضوية وغير العضوية دنج استخراج16،،من1718،،من1920. لأن دنج خليط محبتين، بينت الدراسات أن استخراج العضوية أفضل من الاستخراج غير العضوية8،،من1819. تركيز مجموع بروبولين في دنج الأخضر التايوانية وخصائصه المضادة للبكتيريا هي المؤشرات الرئيسية لنوعية دنج الأخضر التايوانية. وهكذا، والغرض من هذه الدراسة تقديم بروتوكول لاستخدام الإيثانول كمذيب لاستخلاص وتوصيف خصائص مضادة للجراثيم دنج الأخضر التايوانية.
Protocol
Representative Results
Discussion
وأفادت دراسة أن تعطن، باستخدام تركيزات مختلفة من الإيثانول، يمكن أن تستخدم ل استخراج دنج البرازيلي17؛ ومع ذلك، هو العملية تستغرق وقتاً طويلاً17. استغرق 10 أيام على الأقل لاستخراج المركبات النشطة بيولوجيا، مثل محتوى الفينولية، من دنج البرازيلي17. واقتر…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
تم تحرير هذه المخطوطة عن طريق “تحرير والاس الأكاديمية”.
Materials
| ethanol | Sigma-Aldrich | E7023 | |
| Whatman no. 4 filter paper | Sigma-Aldrich | WHA1004125 | |
| methanol | Sigma-Aldrich | 34860 | |
| reverse phase RP-18 column | Phenomenex Inc. | 00G-0234-E0 | |
| Staphylococcus aureus | ATCC | BCRC 10780 | |
| Escherichia coli | ATCC | BCRC 10675 | |
| tryptic soy broth | Sigma-Aldrich | 22092 | |
| nutrient broth | Sigma-Aldrich | 70122 | |
| dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| spice grinder | Waring | WSG60K | |
| microplate Reader | Molecular Devices | EMAX PLUS | |
| HPLC system | Agilent | 1200 Series | |
| vacuum evaporation | BÜCHI | Rotavapor R-215 |
References
- Zabaiou, N., et al. Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product. Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).
- Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin. Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).
- Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).
- Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis. Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).
- Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources. Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).
- Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis. Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).
- Huang, W. J., et al. Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).
- Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis. Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).
- Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis. Zeitschrift für Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).
- Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity. Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).
- Chen, Y. W., et al. Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons. Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).
- Grange, J. M., Davey, R. W. Antibacterial properties of propolis (bee glue). Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).
- Kujumgiev, A., et al. Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins. Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).
- Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus. Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).
- Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan. Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).
- Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents. Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).
- Cunha, I. B. S., et al. Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts. Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).
- Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. Extraction properties of propolis with ethanol concentration. Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).
- Park, Y. K., Ikegaki, M. Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).
- Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity. Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).
- Machado, B. A., et al. Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil. PLoS One. 11 (1), e0145954 (2016).
- Monroy, Y. M., et al. Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water. The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).
- Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan. Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).
- Chen, L. H., et al. Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet. Nutrients. 10 (4), e503 (2018).
