マウスのティッシュの処理の標準化の欠如は、人体標本と比較するとマウスの病理組織学的解析の画質を低下させます。ここでは、炎症や uninflamed での処理とひと試料を埋め込むのため日常的にロボット システムの可能性を示すため大腸組織をマウスの病理組織学的検査を行うためのプロトコルを提案する.
人間の病気の理解は、動物モデルの研究のおかげで大幅に拡張されています。それにもかかわらず、実験モデルの病理組織学的評価は厳格ひと試料に適用する必要があります。確かに、信頼性と正確な結論を導き出す、ティッシュ セクションの準備の質によって影響批判的に。ここでは、マウスのサンプルのパラフィン包埋する初期の準備から、手順の中にいくつかの自動化された手順を実装するマウス組織の病理組織学的解析のためのプロトコルについて述べる。自動化された手順から厳格なプロトコルの標準化、方法論的変数の削減は、マウスの病態解析の全体的な信頼性の向上に貢献します。具体的には、このプロトコル処理の自動化の使用率について説明します、ロボット システムを埋め込む日常的に使用ティッシュの処理、パラフィン包埋ひと試料の腸管炎症のマウス試験片を処理します。マウス組織の病理組織学的検査の信頼性が標準化と自動化技術の導入時に著しく増加することが分かった。
最後の十年では、人間の病気1,2につながる病原性のメカニズムを解剖するいくつか実験的なモデルが開発されています。疾患の重症度を評価するために研究者は治療の効果の評価、細胞学的・組織学的アーキテクチャのバリエーションや炎症3の量を研究する必要があります。それらの実験モデルに実行するには、多くの場合マウスと人間のサンプル4,5を比較詳細な病理組織学的解析が必要です。
また、ひと試料は一般的処理および病理コア施設で得点、を通して経験豊富な人間の病理病理組織学的基準・方法の標準化します。逆に、マウス組織は通常固定、埋め込まれ、病理組織学的プロトコルの限られた経験を持つ研究者によって分析しました。病理組織学的検査の信頼性と品質高品質ティッシュ セクションの準備から始まります。いくつかの要因は、固定、マクロを含む、最終的な分析の品質区分、処理、パラフィンの埋め込みと埋め込みサンプル6、7の増減に批判的に貢献します。
サンプルの操作を含むすべてのこれらの通路は、マニュアル サンプルの埋め込みなど、手作業によるエラーより少ない程度に、手動ミクロトーム切片および汚損にさらされます。現時点では、組織学的評価のためのマウスのティッシュの準備のプロセス全体は、マニュアルや研究室から研究室を異なるプロトコルに依存します。本研究の目的は、マウスの病理組織学的検査の変動とエラーを減らすために標準化された自動化されたプロトコルを実装することです。
我々 の知識を述べるここで完全に自動化された組織処理およびマウスの組織の組織学的評価のための埋め込みの最初のプロトコルこれらは日常的に病理単位で人体標本の分析に使用されます。メソッドの実行可能性の実用的な例として腸炎のマウスモデルが分析されて、すなわち, , 慢性大腸炎モデルによる飲料水8 デキストラン ナトリウム硫酸塩 (DSS) の反復投与、9。DSS 投与動物は、体重減少、軟便または下痢、そして線維症と同様、大腸の短縮など腸の炎症の兆候を示すので人間の炎症性腸疾患 (IBD)10のような密接にこの実験的設定8,9,11。人間の IBD 患者の観察、DSS 治療は複雑な病気のコースを生成します。この文脈では、精巧な組織学的評価は、組織アーキテクチャの深遠な変更を理解する必要があります。したがって、サンプル準備の質を高めるための説明のプロトコルの実装が組織学的の解釈に依存する研究者を受けることが、マウス実験的設定の免疫組織化学的解析。実験モデルマウスの組織構造変化を伴う疾患の細胞組織潜入やさまざまな組織、臓器 (腸、脳、肝臓、皮膚) の炎症の存在使用の品質が向上した、病理組織学的検査のための試料調製。
マウス組織の病理組織学的解析のための準備の間に別の自動化された手順を利用します。このプロトコルは、最終的な病理組織学的評価の全体的な品質を高め、全体のプロセスの標準化し、再現性を高めるための技術的なヒントを提供することを目指しています。自動化された器械と準備をし、組織、人間標本の調査のため病理コア施設で日常的に使用の埋め込み法を実施しています。
<p…The authors have nothing to disclose.
我々 は動物飼育で IEO 動物施設支援のため、テクニカル サポートのためのミラノ IRCCS ポリクリニコ病院の病理を感謝します。
Absolute Ethanol anhydrous | Carlo Erba | 414605 | reagent |
Absolute ETOH | Honeywell | 02860-1L | reagent |
Aluminium Potassium Sulfate | SIGMA | A6435 | reagent |
Aniline Blue | SIGMA | 415049 | reagent |
carbol Fuchsin | SIGMA | C4165 | reagent |
CD11b (clone M1/70) | TONBO biosciences | 35-0112-U100 | antibody |
CD20 IHC (clone SA275A11) | Biolegend | 150403 | antibody |
CD3 (17A2) | TONBO biosciences | 35-0032-U100 | antibody |
CD4 (GK1.5) | BD Biosciences | 552051 | antibody |
CD45.2 (clone 104) | BioLegend | 109837 | antibody |
CD8 (53-6.7) | BD Biosciences | 553031 | antibody |
Citrate Buffer pH 6 10X | SIGMA | C9999 | reagent |
Dab | Vector Laboratories | SK-4100 | reagent |
DPBS 1X | Microgem | L0615-500 | reagent |
DSS | TdB Consultancy | DB001 | reagent |
EDTA | SIGMA | E9884 | reagent |
EnVision Flex Peroxidase-Blocking Reagent | DAKO | compreso in GV80011-2 | |
EnVision Flex Substrate | DAKO | compreso in GV80011-2 | |
EnVision Flex/HRP | DAKO | compreso in GV80011-2 | |
EnVision Flex+ Rat Linker | DAKO | compreso in GV80011-2 | |
Eosin | VWR | 1.09844 | reagent |
F4/80 (clone BM8) | BioLegend | 123108 | antibody |
Formalin | PanReac | 2,529,311,215 | reagent |
glacial acetic acid | SIGMA | 71251 | reagent |
Goat-anti-Rat-HRP | Agilent DAKO | P0448 | antibody |
Haematoxylin | DIAPATH | C0303 | reagent |
LEICA Rotary microtome (RM2255) | Leica | RM2255 | equipment |
Ly6g (clone 1A8) | BD Biosciences | 551459 | antibody |
Mercury II Oxide | SIGMA | 203793 | reagent |
Omnis Clearify Clearing Agent | DAKO | CACLEGAL | reagent |
Omnis EnVision Flex TRS | DAKO | GV80011-2 | reagent |
Orange G | SIGMA | O3756 | reagent |
Paraffin | Sakura | 7052 | reagent |
Peloris | LEICA | equipment | |
Percoll | SIGMA | P4937 | reagent |
RPMI 1640 without L-Glutamine | Microgem | L0501-500 | reagent |
STS020 | Leica | equipment | |
Tissue-Teck Paraform Sectionable Cassette | SAKURA | 7022 | equipment |
Tissue-Tek Automated paraffin embedder | Sakura | equipment | |
Xylene | J.T.Baker | 8080.1000 | reagent |