Detecção de vírus de Bioaerossóis usando resina de troca de ânion

A finalidade desse método é proporcionar uma plataforma de amostragem de bioaerosol altamente sensível para facilitar a detecção molecular do vírus de carga negativa de Bioaerossóis. Microorganismos, incluindo partículas virais, Bioaerossóis podem sobreviver por longos períodos de tempo de¹. Bioaerossóis podem viajar distâncias relativamente longas e manter a viabilidade e a infectividade, como evidenciado por um surto de doença do legionário que originou-se industrial localizados a uma distância de 6 km dos indivíduos afetados de torres de resfriamento e resultou em 18 mortes². Transmissão indirecta de vírus para os seres humanos mediados por Bioaerossóis pode ocorrer em várias configurações e tem sido demonstrado por norovírus surtos em escolas e restaurantes^3,4. Da mesma forma, bioaerosol transmissão do vírus pode ocorrer em configurações agrícolas como em explorações de suínos e aves de capoeira, com esta rota de transmissão, sendo considerada como um fator importante no movimento de vírus entre as instalações de produção^{5, 6 , 7 , 8 , 9}.

Amostragem eficaz de Bioaerossóis carregados de vírus permite a melhoria no diagnóstico rápido e preparação para a prevenção da epidemia, como mostrado em manifestações nas quais H5 gripe, um vírus foram detectados de Bioaerossóis no animal vivo comercializa na China e a Estados Unidos^10,11. Tecnologias atuais de amostragem de bioaerosol envolvem uma série de princípios de captura de partículas diferentes e podem ser amplamente classificadas em impingers, ciclones, pêndulos e filtros¹². Está além do escopo do presente protocolo a cobrir exaustivamente todas as vantagens e desvantagens dessas plataformas para amostragem de vírus de Bioaerossóis; no entanto, pode ser declarado que a maioria destes dispositivos de amostragem não foram otimizada para a coleção de vírus e bacteriófagos¹³. Além disso, infecciosidade de partículas virais é muitas vezes negativamente, com líquido impingers considerados para manter a infectividade viral mais eficazmente do que dispositivos como sólidos de pêndulos ou filtros¹⁴de amostragem. No entanto, uma desvantagem de choque do líquido é o efeito de diluição do alvo, que ocorre porque os vírus são coletados em volumes relativamente grandes (tipicamente ≥ 20 mL) de líquido no recipiente coleção. Outra desvantagem importante envolve a eficiência subótima de líquido impingers para concentrar partículas < 0.5 µM em tamanho¹⁵. No entanto, eficiência de captura desses dispositivos pode ser melhorada por imobilização em matrizes sólidas, como imobilização pode aumentar a conservação do viral de ácidos nucleicos e infectividade viral^16,17.

Nós demonstramos anteriormente que a resina de troca de ânion é uma ferramenta eficaz para a captura e a concentração de vírus do líquido matrizes, incluindo F-RNA bacteriófagos, vírus da hepatite A, adenovírus humano e rotavírus^{18,19 ,20}. Como definido pelo fabricante, a resina de troca de ânion utilizada neste trabalho é uma resina de troca aniônica de base forte poliestireno macroreticular em que amina quaternária funcionalizados grupos mediato atração e captura de anions em um líquido médio²¹ . Consequentemente, a resina de troca de ânion é esperada para capturar o vírus com cargas de superfície net-negativo, incluindo muitos vírus entéricos, vírus da gripe e outros vírus relevantes para a saúde pública e animal.

O protocolo atual envolve a adição de resina de troca de ânion de um impactor líquido. Neste sistema, a resina serve como uma etapa de concentração secundária para partículas virais capturado no líquido impactor. Ácidos nucleicos pode então ser eluídos diretamente em pequenos volumes, fornecendo uma amostra concentrada para análises moleculares. Assim, a principal vantagem deste método é a melhoria na sensibilidade de detecção viral, principalmente através da redução no volume de amostra. Além disso, devido a inerente específico captura de vírus com carga negativa, o método é provável aplicável para a deteção de um grande número de vírus de interesse. Aqui, o método é demonstrado por estirpes vacinais de tipo A e o vírus da influenza tipo B e o coliphage FRNA MS2 (MS2). Estes vírus são detectados posteriormente utilizando ensaios de qRT-PCR padrão como descrito anteriormente,²². O usuário de ponto de extremidade não deve esperar encontrar dificuldades em realizar esse método, porque as modificações aos atualmente existentes equipamentos não constituem grandes perturbações ao fluxo convencional de análise e amostragem de bioaerosol.