En düşük Invaziv embriyo transferi ve tavşan modelinde optimum embriyo aşamasında embriyo vitrifikasyon

İnsan infertilitesini atlayarak veya yüksek genetik değer ve hayvan genetik kaynaklarını koruyan Hayvancılık yaygınlaştırılması amaçlarıyla, teknik bir dizi topluca yardımcı üreme teknolojileri olarak adlandırılan, süperovülasyon gibi, içinde vitro fertilizasyon, embriyo kültürü veya ağoprezervasyon,^1,2geliştirilmiştir. Şu anda, yumurtalıkları uyarmak ve çok sayıda antral ovaryalı folikülleri üretmek için hormonal tedaviler verilir¹. Bu foliküllerden toplanan oositler olgunlaşabilir, döllenmiş ve in vitro olarak geliştirilmiştir ya kriokonservirovannogo ya da vekil annelere transfer edilinceye kadar³. Ancak, bu tedaviler sırasında, gamet ve zigotları bu koşullarda hayatta kalmak için embriyo adaptasyon gerektirebilir fizyolojik olmayan süreçler bir dizi maruz^4,5. Bu adaptasyon erken embriyo plastisite nedeniyle mümkündür, hangi gen ifade ve gelişimsel programlama embriyo değişiklikleri sağlar⁶. Ancak, bu değişiklikler yetişkinliğe kadar embriyo gelişiminin sonraki aşamalarını etkileyebilir, ve şimdi yaygın olarak kabul edilir ki Yöntemler, zamanlama, ağkısızlık prosedürü veya kültür koşulları embriyo kaderi farklı sonuçlar göstermek^{7 , 8}. bu nedenle, sanat spesifik indüklenen etkileri aydınlatmak, iyi karakterize hayvan modellerinin kullanımı kaçınılmazdır.

Meme embriyoları transferinden kaynaklanan ilk belgelenmiş canlı Doğum 1890 yılında gerçekleşti⁹. Bugün, bir vekil dişi embriyo transferi (ET) sonraki embriyo gelişimi aşamalarında Preimplantasyon sırasında sanat kaynaklı etkileri okuyan önemli bir adımdır¹⁰. ET teknikleri her hayvanın büyüklüğü ve anatomik yapısına bağlıdır. Büyük ölçekli hayvan modelleri durumunda, transservikal cerrahi dışı ET teknikleri ile ET gerçekleştirmek mümkün olmuştur, ancak daha küçük boyutlu türler serviks kateterizasyon daha karmaşık ve cerrahi teknikler sık kullanılan¹¹. Ancak, cerrahi ET, implantasyon ve embriyo gelişimini zarar verebilecek kanama neden olabilir, kan uterus lümen istila edebilir gibi, embriyo ölümü¹⁰neden. Transservikal cerrahi dışı et teknikleri hala insanlarda, babunların, sığır, domuz ve fareler¹²,^{13,14,15,16,17}, ancak cerrahi uygulanır Etler hala keçiler, koyun veya diğer hayvanlar gibi tür,^{10,18,19,20,21}, tavşan gibi ek zorluklar mevcut kullanılmaktadır (iki bağımsız sertifikalar) veya fareler (küçük boyut). Yine de, cerrahi transfer yöntemleri giderek daha az invaziv yöntemler ile değiştirildi eğilimindedir. Embriyoları transfer etmek için endoskopi kullanıldı, örneğin, tavşan, domuz ve küçük ruminantlarda^18,19,20. Bu minimal invaziv endoskopi yöntemleri embriyoları ampulla içine infundibulum üzerinden aktarmak için kullanılabilir, hangi tavşan önemlidir ve bazı türler yararlı etkileri göstermiştir²⁰. Bu oviduct erken embriyo aşamalarında embriyo ve anne arasındaki doğru diyalog önemini dayanır. Yukarıda belirtildiği gibi, ovduct aracılığıyla embriyo göçü sırasında tavşanlar içinde yer alan embriyo remodeling,^22,23implant edilebilir embriyolar elde etmek için esastır.

Büyük boyutlu hayvan modelleri, sığır gibi, biyokimyasal ve Preimplantasyon özellikleri insan türlerinin²⁴benzer çünkü ilginç. Ancak, büyük hayvanlar ön denemeler kullanmak için çok pahalıdır, ve kemirgenler ideal bir model olarak kabul edilir (76% model organizmalar kemirgenler) laboratuar araştırması için²⁵. Yine de, tavşan modeli üreme çalışmalarında kemirgenler üzerinde bazı avantajlar sağlar, insanlar tarafından sergilenen bazı üreme Biyolojik süreçler fareler bu daha tavşan benzer. İnsan ve tavşanlar benzer bir kronolojik embriyonik genom aktivasyonu, gastrülasyon ve hemochorial plasenta yapısını sunar. Buna ek olarak, tavşan kullanarak döllenme ve gebelik aşamalarında tam zamanlamasını bilmek mümkündür nedeniyle onların indüklenen yumurtlama²⁵. Tavşan yaşam döngüleri kısa, 31 gün içinde gebelik tamamlama ve yaklaşık 4-5 ay içinde ergenliğe ulaşan; hayvan onun uysal ve agresif olmayan davranışları nedeniyle işlemek kolaydır, ve onun bakım büyük hayvanların pahasına kıyasla çok ekonomiktir. Ayrıca, tavşanların iki bağımsız serviks^11,25ile Dubleks rahim var söz önemlidir. Bu, farklı deneysel grupların embriyoları aynı hayvana aktarılabilir, ancak farklı bir uterus boynuz içine, tercihli bir pozisyonda tavşan yerleştirir. Bu, hem deneysel etkileri karşılaştırmak için, sonuçları maternal faktörü azaltarak bize izin verir.

Günümüzde cerrahi olmayan ET yöntemleri tavşan içinde kullanımda değildir. 90 ‘ ların sonlarında bir transservikal et tekniği kullanılarak yürütülen bazı çalışmalar, cerrahi yöntemlerle% 5,5-20,0%^11,26 VERSUS 50-65% arasında değişen düşük teslimat oranlarında sonuçlanan, bunların arasında laparoskopik prosedür Besenfelder ve Brem¹⁸. Tavşanların bu ameliyatsız ET yöntemlerinin düşük başarı oranları, transservikal ET ‘te önlenmiş olan oviduct ‘de gerekli embriyo remodeling eksikliği ile örtüşür. Burada, bir model organizma olarak tavşan kullanarak etkili bir minimal invaziv laparoskopik ET prosedürü tarif. Bu teknik, büyük hayvanların ve insanlarda daha fazla üreme araştırması için bir model sağlar.

Tavşanların embriyo implantasyonu için özellikle dar bir zaman penceresi olduğu için, bu türdeki ET, ET ‘de embriyonun gelişimsel aşaması ile alıcı²⁷‘ nin fizyolojik durumu arasında yüksek düzeyde senkron gerektirir. Bazı durumlarda, embriyo gelişimini yavaşlatan bir üreme tedavisinden sonra ( In vitro Culture gibi) veya endometrial reseptüsü (superovülasyon tedavileri gibi) değiştirir, embriyo ve maternal uterusun arasında senkron yoktur. Bu durumlar sonucu olumsuz etkileyebilir. Bu bağlamlarda yanıt vermek için, bizi duraklatmak, düzenlemek ve deneyler devam sağlayan etkili bir tavşan Morula vitrifikasyon Protokolü açıklanmaktadır. Bu süreç üreme çalışmaları için Lojistik olarak arzu edilir ve bize embriyoların uzun süreli depolanması için kapasite verir, onların taşıma izin. Laparoskopik prosedür ve ağoprezervasyon stratejileri daha az hayvan ile çalışmaların daha iyi planlamasına olanak sağlar. Böylece, metodolojimiz hijyen ve ekonomik avantajlar sunar ve deneysel hayvanların insan tedavisinin iyileştirilmesi amacı ile hayvan araştırmalarının 3Rs (yedek, azaltma ve arıtma) konseptine uygundur. Böylece, bu yöntemlerle, tavşan in vivo üreme amaçlı ideal bir model organizma oluşturmaktadır.