流体の尾静脈注射を使用してマウス肝細胞の生体内で遺伝的変更の構成および誘導システム

慢性肝疾患は、主要な健康負担世界¹を提示します。動物の研究モデルは肝臓病の研究に不可欠なツール、肝再生、肝炎症脂肪肝と肝細胞癌²複雑な質問に答えることを助けた。これらの動物モデルの相当な数は肝細胞の遺伝子の組み換えに頼る。したがって、肝細胞における遺伝子発現を操作するための効率的なツールは、参考³。遺伝子組み換えマウス系統の繁殖や肝細胞感染のウイルスのベクトルの生成などの確立された方法はいずれかの時間がかかり、港安全性の懸念、または体内肝細胞遺伝子発現の低下をもたらす^4,5. 流体尾静脈注射 (HTVI) は肝臓での遺伝子機能の簡単、高速、かつコスト効率の高い尋問を可能にする肝細胞の生体内でtransfection のための代替方法です。HTVI、生理食塩水注入された動物の体重の 10% に相当する量に必要な DNA シーケンスを運ぶベクターを溶解しています。ソリューションは、5-10 の⁶で尾静脈にそれから注入されます。心拍出量を超える場合、生理食塩水は下大静脈から肝臓の拡大と肝細胞⁷の流体のトランスフェクションにつながる、肝静脈に流れます。安定的なゲノムの統合を達成するためにメソッドは、トランスポゾンを用いたベクトルで寝ている美 –トランスポゾン システムなど結合されています。このシステムは、触媒による睡眠美容 –トランスポザーゼ^8,9ゲノム再結合サイトとターゲット ベクトルの再結合を仲介します。肝線維症や発癌のモデル、それが疾患モデルの特定の時点で過剰または沈黙遺伝子に望まれます。この目的のための Cre/LoxP システムやテトラサイクリン誘導性の遺伝子発現系など誘引可能な遺伝子発現のツール (テトで) 使用される¹⁰があります。

ここでは、眠れるトランスポゾン ベースのシステムの HTVI を使用してマウス肝細胞の生体内でtransfection のためプロトコルについて述べる。タモキシフェン依存 Cre リコンビナーゼ (クレエ) 発現とを組み合わせてより高度なベクトル システムについて述べる肝特異プロモーターの制御下導入遺伝子の安定した、構成式のプロトコルに加えて、発現遺伝子のマイクロ Rna に適応した shRNA (ミール shRNA)、呼ばれる pTC テト システム¹¹。このベクター システムの誘引可能な遺伝子またはテトラサイクリン発現のミール Shrna は過剰クローニング システム、新しいベクトル¹²の迅速かつ簡単の生成を許可するバックボーン ベクターにクローン作成します。このビデオ ベースのガイドには、遺伝子/ミール-shRNA 発現を達成するために適切なベクトル、注入およびマウスの治療の準備と最終的に肝組織の分析のための準備について説明します。このプロトコルで説明する方法は、式に Cre/loxP を介したマウス システムの組み合わせまたは肝臓病の研究に広く適用可能なシステムを作り、好みのあらゆる遺伝子のノックダウンを有効に設計されました。