在下文中，我们目前的量化具体转运方法和测量他们的收费水平由北弄脏。该方法基于第一次由 Varshney等人的技术¹.由成三氯乙酸 (TCA) 收获细胞和保持在 0 ° C，整个 RNA 纯化的样品，tRNA 与氨基酸之间的酯键是保守的^2，，34。Aminoacylated 转运可以区分从 nonacylated 同行通过凝胶电泳和北弄脏，适当降低流动性 aminoacylated tRNA 凝胶，引起共价键绑定的氨基酸⁵中。此外，我们目前的协议规范 tRNA 数量由加法的穗状花序在细胞特异性表达很少使用的 tRNA^{全 4}。

转运是一些最丰富的分子在细菌细胞和翻译机械绝对重要部分。转运绑定氨基酸并将它们传输到翻译的核糖体。氨基酸对转运 （氨或充电） 的绑定被通过氨酰 tRNA 合成酶。不同带电的 Trna 的相对丰度是合成的重要为确保保真度的蛋白质，因为同源任职被控为给定的信使 RNA (mRNA) 密码子 tRNA 增加附近同源 trna 上将的可能性错误地将其氨基酸交付越来越多肽链在核糖体⁶。TRNA 的重要性反映在大肠杆菌细胞广泛响应 tRNA; 收费水平严重下降严格的响应。严格的反应中转运、 核糖体 Rna 和大多数基因的合成降低有利于与氨基酸生物合成和应力生存相关的特定基因转录和细胞的增长速度大大降低⁷.此外，最近由我们和其他人的工作表明，大肠杆菌积极降低其 tRNA 翻译^4，8的极限应力是响应表明 tRNA 水平调整可能绝大多数为应付这样的压力是重要的。因此，可靠的测量 tRNA 丰度和收费水平将充分了解细菌应激反应的重要工具。

大肠杆菌常用表达重组蛋白和由于密码子用法的物种之间存在差异，次优的表达是一个经常遇到的问题⁹。这可以由表达式的翻译重组 mRNA¹⁰所需的额外转运绕过。收费水平在这种菌株的 tRNA 的测量可以引导疑难解答工作及帮助优化蛋白表达。

此方法还使检测的”mischarging”;与一个非同源的氨基酸的 tRNA 分子 aminoacylated。由不同的氨基酸酰化可能会导致 tRNA 要迁移与略有不同的速度通过聚丙烯酰胺凝胶^1，11。在某些情况下，该方法也可用于区分不同的修饰模式否则为相同转运³日。

另一种建立生化过程的 tRNA 收费水平调查是高碘酸氧化。这种方法依赖于观察 aminoacylated tRNA 保护从高碘酸钾氧化和不带电的 tRNA 不是。后高碘酸氧化处理充电 tRNA 用于估计收获 RNA 的收费水平。然而，充电几个转运已被证明受治疗从而提供一些不准确¹²。这里介绍的方法从纯化 RNA 直接充电，因此从化学或酶促反应中排除任何偏见的措施。此方法的一个局限是只有一个 tRNA 种类检测一次，所以虽然同样北污点可以剥离和 reprobed 为多个转运，既费时又有点费力在许多转运上收集数据。

规范样品到彼此的可靠方法是十分重要的研究，目标是跨不同的样品比较分子的相对水平。在这里我们介绍正常化过程为大肠杆菌细胞特异性表达稀有 tRNA^全小分装为穗状花序在添加到 RNA 纯化前的所有实验样品的 RNA。此方法很有用不仅审查转运时但相对定量的任何种类的 RNA 时的实验装置是这样没有内源性 RNA 可以信任要出席所有样品中相同的细胞浓度。例如，”管家”RNA 样核糖体 RNA 水平经常用作内源性的参考比较另一个 RNA 之间不同的相对数量样品¹³。但这是没有多大用处如果参考 RNA 细胞浓度变化之间的样品，可以出现这种情况为核糖体 RNA，如果采样发生在应力响应^15，，1617期间或进入固定相¹⁷。增加了穗在细胞 RNA 纯化前对实验样品提供规范化的采样设置独立固体和准确的方式。标准化的另一种是另外的一个或多个穗状花序在 Rna 的实验样品 RNA 纯化后。然而，这种方法不占任何在 RNA 恢复样品之间的差异。

利用大肠杆菌细胞 RNA 参考为穗状花序在单元格 （见图 1） 在实验中对大肠杆菌有它结果的缺点，overexpress 另外少量的外源性大肠杆菌的总 RNA样品。我们通过分析示例包含只有穗在细胞中平行实验的样本 （见图 2，车道标记为”全”蛋白免疫印迹北） 更正此添加。议定书 》，提出了一种针对大肠杆菌K-12 但可能是适用于大多数的细菌种类。