Grabaciones de parche de sujeción de células enteras de células epiteliales primarias aisladas del epidídimo

El epidídimo en el tracto reproductor masculino es un órgano revestido con una capa de células epiteliales de mosaico. Al igual que en otros tejidos epiteliales, los diversos tipos celulares del epitelio epidídimo, incluyendo células principales, células claras, células basales y células de los sistemas inmunológico y linfático, trabajan de manera concertada para funcionar como la barrera en el frente del túbulo y como Células de apoyo para la maduración de los espermatozoides y la fisiología ^{1 , 2 , 3} . Por lo tanto, estas células epiteliales desempeñan un papel esencial en la salud reproductiva.

Las células epiteliales se consideran generalmente como células no excitables que son incapaces de generar potenciales de acción de todo o nada en respuesta a los estímulos despolarizantes, debido a la falta de canales de Na ⁺ o Ca ^{2 + con} voltaje controlado ^{4 , 5} . Sin embargo, las células epiteliales expresan uniQue conjuntos de canales de iones y los transportadores que regulan sus funciones fisiológicas especializadas, como la secreción y el transporte de nutrientes [ ^6] . Diferentes células epiteliales, por lo tanto, poseen características eléctricas características. Por ejemplo, las células principales expresan el CFTR para el transporte de fluidos y cloruros y expresan el TRPV6 para la reabsorción de calcio, mientras que las células claras expresan la bomba de protones V-ATPasa para la acidificación luminal ^{1 , 7 , 8 , 9} . Algunos transportadores y canales iónicos que regulan las características fisiológicas de las células epiteliales epididimales han sido reportados, pero las propiedades funcionales de las células epiteliales epididimales en gran parte aún no se conocen ^{10 , 11 , 12 , 13} .

WhOle-cell patch-clamp es una técnica bien establecida para examinar las propiedades intrínsecas de ambas células excitables y no excitables, y es particularmente útil para estudiar las funciones de células primariamente disociadas en muestras de células heterogéneas; La pinza de tensión se utiliza para medir las propiedades de la membrana pasiva y las corrientes iónicas de las células individuales ^{14 , 15} . Las propiedades de la membrana pasiva incluyen resistencia de entrada y capacitancia. El primer parámetro indica la conductancia intrínseca de la membrana, mientras que el segundo implica el área superficial de la membrana celular (una bicapa de fosfolípidos, donde están localizados los canales iónicos y los transportadores, que sirve como aislante fino que separa los medios extracelulares e intracelulares). La capacitancia de la membrana es directamente proporcional a la superficie de la membrana celular. Junto con la resistencia de la membrana que se refleja por la resistencia de entrada, la constante de tiempo de la membrana, wQue indica la rapidez con que el potencial de la membrana celular responde al flujo de las corrientes de los canales iónicos. A este respecto, al combinar las características de respuesta de corriente de una serie de etapas de tensión aplicadas a las células, se determinan las cinéticas biofísicas y las propiedades de las células ^{15 , 16 , 17 , 18} .

En el presente artículo se describen los procedimientos para aislar células epiteliales del epidídimo de cauda de rata y los pasos para medir las propiedades de membrana de diferentes tipos de células en la mezcla de células disociadas usando la abrazadera de parche de células enteras. Se muestra que las células epididimales principales exhiben propiedades electrofisiológicas de membrana distintas y que las conductancias pueden identificarse fácilmente a partir de otros tipos de células.