Enregistrements de puces et de cellules entières de cellules épithéliales primaires isolées de l'épididyme

L'épididyme dans le tractus reproducteur masculin est un organe doublé d'une couche de cellules épithéliales en mosaïque. Comme dans d'autres tissus épithéliaux, les différents types cellulaires de l'épithélium épididymal, y compris les cellules principales, les cellules claires, les cellules basales et les cellules des systèmes immunologiques et lymphatiques, fonctionnent de manière concertée pour fonctionner comme barrière à la ligne de front du tubule et en tant que Cellules de soutien pour la maturation du sperme et la physiologie ^{1 , 2 , 3} . Ainsi, ces cellules épithéliales jouent un rôle essentiel dans la santé reproductive.

Les cellules épithéliales sont généralement considérées comme des cellules non excitables qui ne permettent pas de générer des potentiels d'action tout ou rien en réponse à des stimuli dépolarisants, en raison du manque de canaux Na ⁺ ou Ca ^{2+ 4 , 5} de tension. Cependant, les cellules épithéliales expriment uniQuels ensembles de canaux ioniques et de transporteurs qui régulent leurs rôles physiologiques spécialisés, tels que la sécrétion et le transport d'éléments nutritifs ⁶ . Par conséquent, différentes cellules épithéliales possèdent des propriétés électriques caractéristiques. Par exemple, les cellules principales expriment le CFTR pour le transport des fluides et des chlorures et expriment le TRPV6 pour la réabsorption du calcium, tandis que les cellules claires expriment la pompe à protons V-ATPase pour l'acidification luminal ^{1 , 7 , 8 , 9} . Certains transporteurs et canaux ioniques qui régulent les caractéristiques physiologiques des cellules épithéliales épididymatiques ont été rapportés, mais les propriétés fonctionnelles des cellules épithéliales épididymatiques ne sont pas encore comprises ^{10 , 11 , 12 , 13} .

WhL'enregistrement de la pince à l'aide d'une cellule oléicole est une technique bien établie pour examiner les propriétés intrinsèques des cellules excitables et non excitables et est particulièrement utile pour étudier les fonctions des cellules principalement dissociées dans des échantillons cellulaires hétérogènes; La tension de serrage est utilisée pour mesurer les propriétés de la membrane passive et les courants ioniques des cellules individuelles ^{14 , 15} . Les propriétés de la membrane passive comprennent la résistance d'entrée et la capacité. Le premier paramètre indique la conductance de la membrane intrinsèque, tandis que ce dernier implique la surface de la membrane cellulaire (une bicouche de phospholipides, où se trouvent les canaux ioniques et les transporteurs, qui sert d'isolant mince séparant les milieux extracellulaires et intracellulaires). La capacité de la membrane est directement proportionnelle à la surface de la membrane cellulaire. Avec la résistance de la membrane qui est réfléchie par la résistance d'entrée, la constante de temps de la membrane, wCe qui indique la rapidité avec laquelle le potentiel de la membrane cellulaire répond au flux des courants des canaux ioniques, peut être déterminé. À cet égard, en combinant les caractéristiques de réponse actuelles d'une série d'étapes de tension appliquées aux cellules, la cinétique biophysique et les propriétés des cellules sont déterminées ^{15 , 16 , 17 , 18} .

Dans le présent document, nous décrivons les procédures d'isolement des cellules épithéliales à partir de l'épididyme de la queue du rat et les étapes pour mesurer les propriétés de la membrane de différents types de cellules dans le mélange de cellules dissociées en utilisant la pince à cellules entières. Nous montrons que les cellules principales épididymiques présentent des propriétés électrophysiologiques membranaires distinctes et que les conductances peuvent être facilement identifiées à partir d'autres types de cellules.