Ein Hochdurchsatz-Assay unterstützte Wirksamkeit von Medikamenten gegen Makrophagen agierten zur Bewertung<em> Mycobacterium tuberculosis</em

Tuberkulose (TB) bleibt eine ernsthafte globale Bedrohung für die Gesundheit trotz der Verfügbarkeit von Anti-TB – Chemotherapien seit über 40 Jahren ^ein. Dies ist zum Teil auf die Forderung nach langen Behandlungszeiten von mehr als 6 Monaten mehrere Arzneimittelkombinationen, die die Nichteinhaltung ² zu Patient führt. Die Entstehung von arzneimittelresistenten TB in den letzten Jahren hat weitere Probleme in einem Bereich verstärkt , in der erfolgreiche Entwicklung klinisch zugelassenen Medikamente ³ praktisch nicht existent ist. Denn trotz erschöpfende Anti-TB – Medikamentenentwicklung, nur ein einziges Medikament für die klinische Anwendung FDA gewesen ⁴ in den letzten 40 Jahren zugelassen. So werden neue Generationen von Anti-TB-Medikamente sind dringend erforderlich, um dieses Problem zu lösen.

Ein wesentliches Problem bei der TB Drug Discovery ist der Mangel an erfolgreichen Transfer von Verbindungen mit in – vitro – Aktivität zur Wirksamkeit in der klinischen Einstellung= "Xref"> ^{5, 6, 7.} Zunächst wurden Zielbasierte Ansätze verwendet ⁵ für Anti- Mtb Drogen zu screenen, die in ganze Bakterienzellen zu übersetzen ist fehlgeschlagen. Selbst wenn Mtb – Zellen verwendet werden, wird es oft durchgeführt Brühe gewachsenen Kulturen verwendet, die nicht genau Arzneimittelwirksamkeit in vivo ^{8, 9} vorherzusagen. Diese Probleme wurden erkannt und Wirkstoff – Screening – Assays gegen Makrophagen enthalten , Mtb oder latent Mtb wurden erfolgreich etabliert ^{8, 10, 11, 12.} Aber auch diese erweiterte Tests geben keine ausreichende Berücksichtigung der Durchdringung Barrieren, die Drogen in den nicht-gefäßLungenLäsionen auftreten, und in der Nekrosen an der Stelle der Infektion. Tatsächlich, Auch für die First-Line – TB – Medikamente Rifampicin, suboptimale Dosierung wurde ^{13, 14, 15} als auch in vivo Gewebe und Zerebrospinalflüssigkeit (CSF) Penetration aufgrund unzureichender in Frage gestellt als Wirksamkeit gegen intrazelluläre Mtb ^{8 verringert, 9.} Als solche neue Modelle und Tests, die Berücksichtigung dieser Parameter während der frühen Führung Entwicklungsprozess zweifellos TB Drug Discovery nehmen würde Anstrengungen verbessern würde.

Um diesem Bedarf zu begegnen, wir eine kostengünstige, schnelle und BSL-2 – kompatible Alternative Infektionsmodell für Mtb Arzneimittelwirksamkeitsprüfung ¹⁶ vor kurzem etabliert. Diese Infektionsmodell produziert dicht Mtb verpackt in großen Makrophagen Aggregatstrukturen, die physiologisch relevante zelluläre Penetrationsbarrieren rekapituliert und erzeugt Makrophagen-agierten <em> Mtb mit einem veränderten physiologischen Zustand latenten Mtb ähnelt. Mtb von dieser Infektion Modell abgeleitet wurde mit dem Resazurin Mikrotitertest (REMA) kombiniert Wirksamkeit von Medikamenten zu bewerten, die mit der berichteten Fähigkeit von gemeinsamen TB – Medikamente Ergebnisse im Einklang mit anderen intrazellulären Infektionsmodellen und korreliert gut produziert hohen CSF – Konzentrationen in Bezug auf Serumkonzentrationen erzielen ^16.

Hier beschreiben wir ausführlich in der Erzeugung von Mtb / Makrophagen – Aggregatstrukturen Makrophagen-agierten Mtb geeignet für die Arzneimittelempfindlichkeitstests unter Verwendung von REMA herzustellen. Insbesondere zeigen wir, wie diese Infektion System auf eine 96-Well-Format für die Kompatibilität mit Durchsatz-Screening von Kandidaten-Anti-TB-Medikamente angepasst werden könnte.