Um ensaio Compatível de alta capacidade para avaliar droga Eficácia contra macrófagos passadas<em> Mycobacterium tuberculosis</em

A tuberculose (TB) continua a ser uma séria ameaça à saúde global, apesar da disponibilidade de regimes de quimioterapia anti-tuberculose há mais de 40 anos ^1. Isto é devido em parte à exigência de períodos de tratamento longo de mais de seis meses usando várias combinações de medicamentos, o que leva a paciente a não conformidade ^2. O surgimento de tuberculose resistente a medicamentos nos últimos anos tem agravado os problemas em um campo onde o desenvolvimento bem sucedido de drogas clinicamente aprovados é praticamente inexistente ^3. Na verdade, apesar do desenvolvimento exaustiva de drogas anti-TB, apenas uma única droga foi aprovada pela FDA para uso clínico nos últimos 40 anos ^4. Assim, as novas gerações de medicamentos anti-tuberculose são urgentemente necessárias para resolver este problema.

Um problema fundamental na descoberta TB é a falta de sucesso da transferência a partir de compostos com actividade in vitro para a eficácia no ambiente clínico= "xref"> ^{5, 6, 7.} Inicialmente, as abordagens baseadas alvo foram utilizadas para pesquisar drogas anti-Mtb ^5, que não se traduziu em células bacterianas inteiras. Mesmo quando são utilizadas células de M. tuberculosis, que é frequentemente realizada usando caldo cultivado culturas, que não prevêem com precisão a eficácia do fármaco in vivo, ^{8, 9.} Estes problemas têm sido reconhecidas e ensaios de rastreio de drogas contra macrófagos contendo M. tuberculosis ou M. tuberculosis latente foram estabelecidas com êxito ^{8, 10, 11, 12.} No entanto, mesmo esses ensaios mais avançados, não dão conta suficiente para as barreiras de penetração que as drogas encontram nas lesões pulmonares não vascularizados, e na focos de necrose no local da infecção. De fato, Até mesmo para a primeira linha TB rifampicina droga, a dose sub-óptima tem sido questionada devido à inadequada no tecido vivo e líquido cefalorraquidiano (LCR) penetração ^{13, 14, 15,} bem como diminuição da eficácia contra intracelular Mtb ^{8, 9.} Como tal, os novos modelos e ensaios que tenham em conta esses parâmetros durante o processo de desenvolvimento de liderança no início, sem dúvida, melhorar a TB esforços de descoberta de drogas.

Para atender a essa necessidade, que recentemente estabeleceu um 2 BSL-modelo de infecção barato, rápido e compatível alternativa para Mtb droga testes de eficácia ^16. Este modelo de infecção produzida densamente Mtb dentro de grandes estruturas agregadas de macrófagos, que recapitulou as barreiras de penetração celular fisiologicamente relevantes e gerou macrófagos passadas <em> Mtb com um estado fisiológico alterado assemelhando-se latente Mtb. Mtb derivado deste modelo de infecção foi combinado com o ensaio de microplaca com resazurina (REMA) para avaliar a eficácia da droga, o que produziu resultados consistentes com outros modelos de infecção intracelular e bem correlacionado com a capacidade reportada das drogas comuns TB para atingir concentrações elevadas de CSF em relação às concentrações séricas ^16.

Aqui nós descrevemos em detalhe a geração de Mtb / estruturas de agregação de macrófagos para produzir e macrófagos passadas Mtb apropriado para o teste de sensibilidade às drogas usando REMA. Em particular, mostra-se como este sistema de infecção poderia ser adaptado a um formato de 96 poços para compatibilidade com throughput screening de candidatos de drogas anti-TB.