הערכת Transcutaneous של תפקוד כלייתי במכרסמי Conscious

ניסויי צורך לפתח את הפרוטוקול בוצעו על פי תקנות לאומיות ואושרו על ידי ועדת המדע האתית המקומית (Regierungspräsidium קרלסרוהה). 1. הכנת פתרון הזרקת FITC-sinistrin ממסי FITC-sinistrin מלוח פיסיולוגי להכין פתרון מניות. המינון המומלץ בעכברים הוא משקל הגוף 7.5 מ"ג / 100 גרם (BW), ואילו אצל חולדות 5 מ"ג / 100 גרם BW FITC-sinistrin עדיפה. עבור עכברים, להכין פתרון של פתרון המניות FITC-sinistrin ב 15 מ"ג / מ"ל, ואילו עבור חולדות להכין בריכוז של 40 מ"ג / מ"ל. הערה: פתרון המניות FITC-sinistrin ניתן להכין מראש ולאחסן ב -20 ° C מוגן מפני אור. 2. הכנת בעלי חיים לאקלם בעלי חיים לפחות שבוע לפני כניסתה שלהם בכל ניסוי. להרדים את החיה באמצעות isoflurane 5% לאחר 5 L / min O 2 </sub> לזרום למשך 2 דקות. ודא החיה הוא מורדם כראוי על ידי התבוננות בנשימה שלה, אשר הופך איטי יותר ויותר, ולאמת חוסר תגובה עם חוסר תגובה הבוהן. לאחר שהחיה היא ישנה, ​​להפחית את ההרדמה isoflurane 2.5% ב 2 ליטר / דקה O 2 קצב משלוח ולקחת את BW. הסר את הפרווה מן האגף של החלק האחורי של החיה באמצעות מכונת גילוח חשמלית. לגלח שטח מעט גדול יותר באזור זה יהיה תפוס על ידי התיקון דבק דו-צדדי, אשר יש ממדים של 3 ס"מ x 6 ס"מ. בהמשך להחיל קרם להסרת שיער לתקופה קצרה (2-3 דקות) כדי להסיר את הפרווה הנותרת. לשטוף את האזור ביסודיות עד השמנת הוסרה לחלוטין, כמו השמנת עצמו עשויה להיות פלורסנט. הערה: הימנע מגרד את העור של החיה כפי שהוא יכול לייצר / בצקת גירוי. אם האזור המקולף מראה פיגמנטציה על העור, לגלח אזור גדול עד נקודה הלא פיגמנט עבורחלק אופטי של המכשיר נמצא. מומלץ לגלח 24 שעות מראש על מנת למזער את חשיפת הרדמה. 3. התקן כנה מניח את המכשיר האופטי למדידת תפקוד כליות על צד אחד של התיקון הדבק דו-צדדי, מיצוב החלק האופטי מעל החלון השקוף (איור 1) לעזוב את החלק השני עם רדיד מגן. הערה: כשעובדים עם מכרסמים קטנים, להקטין את הגודל של התיקון כפי שמוצג באיור 2. צרף חתיכת תיקון דבק דו-צדדי של גודל התאמת לסוללה כפי שמוצג באיור 3. קיבוע 4. של ההתקן על בעלי החיים חשבתי את הנפח המתאים של הזרקה מבוססת על משקל הגוף החי. להרדים את החיה עם isoflurane כפי שצוין בעבר על סעיפים 2.1-2.3. חותכים חתיכה של o תחבושת גזה צינורי אלסטיf על 1 ס"מ יותר מאשר רוחב של תיקון דבק דו צדדית כדי לשמש. משוך את תחבושת גזה אלסטי על הראש של החיה ומניחים על גבו, עוזב את האזור מגולח חשוף. הערה: לחילופין, לתקן את המכשיר באמצעות סרט דביק, אלא להיות מודע לחץ מיותר על המכשיר. חבר את הסוללה למכשיר באמצעות חיבור מחבר לסוללה לנמל המתאים בהתקן. לאחר מכן מורידים את נייר הכסף מגן מן היצירה של תיקון ו הר הסוללה על פני השטח העליונים של המכשיר (איור 4 א). ודא כי הסוללה מחוברת כמו שצריך על ידי סימון כי המכשיר מתחיל להבהב. הערה: חולדות, הסוללה יכולה להיות גם מחוברת ישירות על התיקון הדבק, לצד ההתקן (האיור 4B). הסר את כיסוי המגן מן התיקון עם המכשיר פועל ומניח אותו על האזור המגולח על גב החיה מחזיק אותוs קצוות עד שהוא קבוע כראוי. מכסה את המכשיר עם תחבושת גזת צינורי אלסטי הדבקה אותה אל פני השטח הדבקים של התיקון (איור 5). כראוי למתוח את התחבושת צינורי על הבטן של החיה, על מנת להבטיח כי הגפיים יכולים לנוע בחופשיות. עבור קיבעון הגנה טוב יותר של המכשיר, להחיל פיסת נייר דבק בעקבות הצורה של המכשיר ומכסה את החוטים של הסוללה. מדוד הרקע 1 עד 3 דקות, ללא הפעלת לחץ על התקן מינהל 5. FITC-sinistrin ונוהל מדידה במידת הצורך, לחמם את הזנב של החיה באמצעות מים חמים לפני הזריקה או צלחת חימום בטמפרטורה מבוקרת לאורך כל ההליך. להזריק דרך זנב וריד הנפח המתאים של פתרון מניות FITC-sinistrin. היקף ההזרקה תלוי BW חיה ולכן יש לחשב לכל וחסרונות פרטidering מינון הריכוז הרצוי של פתרון מניות, כאמור בסעיף 1.1. ודא כי כל פתרון FITC-sinistrin ניתנת בהזרקה לווריד ולא תת-עורית. הערה: לחילופין, FITC-sinistrin יכול להינתן באמצעות קטטר תוך ורידי מראש מושתל יצאו לעבר העורף במכרסמים או באמצעות זריקה מסלולית רטרו בעכברים. בזהירות, ולהחזיר את בעל החיים לכלוב בבית שלו הימנעות תנועות חזקות וכל הלחץ על המכשיר, כפי שהוא היה צריך להכניס חפצים התנועה. מניח את הכלוב הביתה במקום רגוע להימנע שהחיה מופרת. בצע את המדידה במהלך לפחות שעה 1 אם עובד עם עכברים 2 hr בעת שימוש חולדות. באותה תקופה, ההתקן האופטי ימדוד דרך העור את הקרינה הנפלטת FITC-sinistrin. הערה: בתקופת הקלטת החיה חייבת להתארח לבד. יתר על כן אספקת מים, כמו גם בולטמבנים כגון מכסי החוט, יש להסיר כדי למנוע ניזק של חפצי מכשיר ותנועה האלקטרוניים בשל השפעות בחפצים. הסרת התקן 6. לאחר תקופת ההקלטה נגמרה, הסר את ההתקן ללא הרדמה; עם זאת, אם יש צורך בכך, להרדים את החיה לזמן קצר תחת isoflurane 5% לאחר 5 L / min שיעור משלוח O 2 במהלך 2 דקות. בזהירות, לשלוף את הסרט הדביק תחילה, ואחר כך את התחבושת צינורי. בעדינות לנתק את התיקון דבק דו-צדדי מן העור ולהחזיר את בעל החיים לכלוב בבית הרגיל שלו. 7. קראו מתוך נתונים נתק את הסוללה מהמכשיר להסיר את התיקון דבק. הערה: הנתונים מאוחסנים על המכשיר עד מדידה חדשה מתחילה. כאשר הסוללה מחוברת הנתונים המאוחסנים הם מוחלפים עם ההקלטות החדשות. לכן, לא מחדש את הסוללה לפני הורדת נתונים מןהֶתקֵן. יש תקופת חסד 10 שניות מיועד חיבורים מחדש בשוגג של הסוללה. חבר את המכשיר למחשב באמצעות כבל USB מיקרו ולהוריד את הנתונים באמצעות התוכנה המצורפת. קובץ הפלט הוא קובץ csv שניתן לפתוח ולשנות באמצעות תוכנת גיליונות אלקטרוניים. פתח את קובץ נתונים עם התוכנה הספציפית עבור המכשיר האופטי וליצור עקומת קינטיקה חיסול באמצעות פרוטוקולי תוכנה. ניתוח העקום ידי ביצוע ההוראות שסופקו עם המכשיר האופטי. זמן קצר, לצורך הערכת הנתונים, להגדיר את אות הרקע אשר נמדדה לפני ממשל FITC-sinistrin ולסמן את תחילת שלב הפרשת המעריכים של הסמן, אשר מתרחש בדרך כלל 15 דקות ו -45 דקות לאחר הזרקת בולוס, עכברים וחולדות בהתאמה . הערה: התוכנה תציג אוטומטית את FITC-sinistrin מחצית החיים (t 1/2) יחד עם ערך 2 R, נקבע על ידי 1-comparמודל tment. t 1/2 יכול להיות מנוצל כדי לחשב GFR באמצעות מקדם המרה 9,10.