В Utero Intra-сердечная томатно-лектин инъекций по эмбрионов мыши, чтобы измерить почек кровотока

Во время эмбрионального развития два дискретные, но одновременно, сосудистые процессы происходят: ангиогенез, процесс, при котором сосуд растет от основной предварительно существующего судна, и васкулогенезе, который заново образование сосудов из жилых эндотелиальных клеток-предшественников ^1,2. Соответственно, первое является синонимом кровотока, а второй, как полагают, в значительной степени имеют место в отсутствие него.

Одновременно с образованием кровеносных сосудов, циклический и динамичный процесс синтеза почек клеток-предшественников, пролиферации и дифференцировки начинает разворачиваться на день эмбрионального 9,5 (E9.5). На данный момент мочеточника бутон (UB) вторгается дорсально в окружающую метанефрической мезенхиму (мм), и продолжается до рождения ^3. Повторное разветвление UB в быстро конденсации метанефрической крышки мезенхимы начинается формирование функциональных подразделений почек, нефрона. С каждым новым поколением УБ и НефРон, старшие поколения смещаются во внутренние коркового и мозгового регионах, где они затем подвергаются дальнейшему созреванию и дифференциации в первую очередь сосудисто-плотных средах. Как видно из Дресслера и др., ^3, этот процесс эмбрионального осаждают индуктивной передачи сигналов, таких как перекрестные помехи между UB и ММ, и множество внеклеточных факторов ^3-6. Два недавно исследовали внеклеточные факторы в рамках развивающегося поджелудочной железы и почки включают напряжение кислорода и кровоснабжение ^7,8. Последнее будет обсуждаться более подробно ниже со отношению к развитию почек.

Для того, чтобы подвергать индуктивный роль, что поток крови потенциально играют в дифференциации клеток-предшественников нефрона, а также в других процессах органогенеза, точных и точных методов эмбрионального отображения кровотока является обязательным условием.

Альтернативные методы замера кровоток включают рецепт улtrasound изображений и смолы бросает ^9,10. Окончательно, эти режимы, как было показано, чтобы быть по своей природе не хватает в их способности одновременно обнародует временные и пространственные сопоставления между кровотоком и дифференцировку стволовых клеток. Смола отливок, например, обеспечить действительное модель сосуда рисунка в тканях взрослого организма, однако в незрелых сосудов, таких как эмбриональные с моментами времени, сосуды сильно развиты и вытекающей. Таким образом, смола бросает не проведет в крошечных, часто пористый, сосудов.

Для этих очевидных препятствий, в частности, мы решили включить УЗИ наведением в естественных условиях внутри сердца эмбриональных помидор лектина (TL) микроинъекций в наших исследованиях развития почек. В этой процедуре мы используем ультразвуковой зонд синхронно направлять установленный микропипетки иглы, наполненный 2,5 мкл TL раствора в левый желудочек из мышиных эмбрионов в точках E11.5, E13.5, E15.5, E17.5 и время. E170,5 является последняя возраст развитием, иглы не достаточно сильны, чтобы проникнуть в более развитый эмбрион.

Преимущества этого метода микроинъекции в изобилии. Ультразвуковая руководствуясь микроинъекции позволяет точно позиционировать иглу для инъекций в течение эмбрионального левого желудочка, пассивный и контролируемое изгнание раствора в бьющееся сердце животного, минимальным ущербом для сердца и окружающих тканей, и во избежание внезапной сердечной недостаточности и смерти эмбрион до полного тела перфузии. С использованием FITC-меченого TL, любой перфузии сосудистой будет поддерживать маркер вдоль ее эндотелиальной апикальной мембране. В сочетании с иммуногистохимии, используя PECAM (CD31, тромбоцитов эндотелия молекулы клеточной адгезии) и различные другие сосудистые маркеры, мы можем четко различать перфузируемые и ООН-перфузии сосудов, а также охарактеризовать любые аберрантные окрашивание окружающих тканей.