Minimal-invasive Technik für die Injektion in Ratten-Optic Nerve
Summary
Direct injection into the rat optic nerve is useful for regenerative research. We demonstrate a minimally-invasive technique for direct injection into a rat optic nerve that does not involve opening the skull. Using this method, surgical complications are minimized and recovery is more rapid.
Abstract
The rat optic nerve is a useful model for stem cell regeneration research. Direct injection into the rat optic nerve allows delivery into the central nervous system in a minimally-invasive surgery without bone removal. This technique describes an approach to visualization and direct injection of the optic nerve following minor fascial dissection from the orbital ridge, using a conjunctival traction suture to gently pull the eye down and out. Representative examples of an injected optic nerve show successful injection of dyed beads.
Introduction
Der Sehnerv ist ein idealer Ort für das zentrale Nervensystem (ZNS) regenerative Forschung einschließlich ophthalmologische Erkrankungen wie Sehnervenentzündung, Glaukom und Trauma. Injektionen mit einer Vielzahl von Stammzellen wurden entweder Wirksamkeit gezeigt oder als vielversprechend bei der Ersetzung verlorener Myelin Erhöhung axonalen Zahl und / oder Prävention von degenerativen Erkrankungen. 1,2
Der menschliche Sehnerv enthält etwa 1,2 Millionen parallel Axone Weg von der Netzhaut zum chiasm mit einem Durchmesser von etwa 3,0-3,5 mm. 3 bei Erkrankungen des Menschen im Labor Modell wurde die Ratte häufig verwendet worden. Erwachsene Ratten Sehnerv enthält ungefähr 100.000 Axone innerhalb eines Durchmessers von etwa 0,5 mm. 4 eine der Hauptbeschränkungen bei der ZNS-regenerative Forschung direkten Zugriff ohne Knochen. Komplikationen und Operationsrisiken für das Tier sind höher, wenn der Schädel oder Wirbeln entfernt werden. Ähnlich zu den Vorteilenminimalinvasive Ansätze in der Wirbelsäule, 5 direkte Sehnerv Injektionen ohne Öffnen der Schädel Angebot reduziert Komplikationen und eine schnellere Erholung.
Diese Technik wurde in früheren Studien verwendet worden. 6 In diesem Manuskript und begleitende Video zeigen wir eine minimal-invasives Verfahren zur Gewinnung von Stammzellen in der Ratte Sehnerv injizieren.
Protocol
Representative Results
Discussion
Direct injection into the optic nerve of stem cells or other products intended to facilitate regeneration provides a convenient model compared to other means of injections into the CNS. This technique takes less time, requires less total anesthesia, avoids drilling or removing skull or bone tissue, reduces complications rates and allows for more rapid recovery following surgery.
The most critical steps in this protocol include: 1. Adequate hemostasis in the surgical field to allow clear visua…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This study was supported by NeuralStem, Inc., and Johns Hopkins Project RESTORE.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Lewis rat | Charles River | 4 | Any rat strain will work. |
| Anesthesia machine | Surgivet | CDS9000 | CDS 9000 Small Animal Anesthesia Machine – Pole Mount |
| Infusion pump | Stoelting | 53129 | |
| Dissection microscope | National Optical | 409-411-1105 | |
| Fiber-optic light source | Fisher Scientific | 12-562-21 | |
| Dissection and Stereotaxic Instrument | Stoelting | 51400 | |
| Pipette Puller | Kopf | 750 | |
| Pipettes | World Precision Instruments | 18150-6 | |
| Disposable scalpel blades | Harvard Apparatus | 810-15-021 | |
| Iridectomy scissors | Electron Microscopy Sciences | Uniband LA-4XF |
References
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