Несколько протоколов свет повреждения были описаны повреждения фоторецепторов и, следовательно, вызвать регенерацию сетчатки в ответ взрослых данио. Этот протокол описывает усовершенствованный способ, который можно использовать в пигментированных животных и который повреждает подавляющее большинство палочек и колбочек фоторецепторов по всей сетчатки.
Светоиндуцированный дегенерации сетчатки (LIRD) обычно используется как у грызунов и рыбок данио к стержню повреждения и конус фоторецепторов. В взрослых данио, вызывает дегенерацию фоторецепторов Müller глиальные клетки, чтобы вновь войти в клеточный цикл и оказывать кратковременное усиливающее предшественников. Эти предшественники продолжают размножаться, как они мигрируют в поврежденную область, где они в конечном счете привести к появлению новых фоторецепторов. В настоящее время существует два широко используемых LIRD парадигмы, каждый из которых приводит к различной степени потери фоторецепторов и соответствующих различий в регенерации ответа. Чем больше генетических и фармакологические средства доступны для проверки роли отдельных интересующих генов в процессе регенерации, существует необходимость в разработке надежной LIRD парадигме. Здесь мы опишем LIRD протокол, который приводит к широко распространенной и последовательной потере и палочек и колбочек, фоторецепторы, в котором мы объединили использование двух ранее установленных LIRD методов. Более того, Этот протокол может быть расширен для использования в пигментированных животных, что устраняет необходимость поддержания трансгенных линий процентов на альбиноса фон для исследования LIRD.
Светоиндуцированный дегенерации сетчатки (LIRD) обычно используется как у грызунов и рыбок данио к стержню повреждения и конус фоторецепторов. В взрослых данио, вызывает дегенерацию фоторецепторов Müller глиальные клетки, чтобы вновь войти в клеточный цикл и оказывать кратковременное усиливающее предшественников. Эти предшественники продолжают размножаться, как они мигрируют в поврежденную область, где они в конечном счете привести к появлению новых фоторецепторов. В настоящее время существует два широко используемых LIRD парадигмы, каждый из которых приводит к различной степени потери фоторецепторов и соответствующих различий в регенерации ответа. Чем больше генетических и фармакологические средства доступны для проверки роли отдельных интересующих генов в процессе регенерации, существует необходимость в разработке надежной LIRD парадигме. Здесь мы опишем LIRD протокол, который приводит к широко распространенной и последовательной потере и палочек и колбочек, фоторецепторы, в котором мы объединили использование двух ранее установленных LIRD методов. Более того, Этот протокол может быть расширен для использования в пигментированных животных, что устраняет необходимость поддержания трансгенных линий процентов на альбиноса фон для исследования LIRD.
Здесь мы показываем, что сочетание короткого ультрафиолетового облучения с постоянным ярким светом воздействие приводит к массовой гибели фоторецепторов и устойчивых мер в ответ регенерации. По сравнению с отдельными методами LIRD, это комбинированный метод также является наиболее эф…
The authors have nothing to disclose.
Авторы хотели бы поблагодарить Xixia Ло за отличную рыбу хозяйство и техническую поддержку. Эта работа финансировалась Национальным институтом здоровья гранты R21EY019401 (RT) и P30EY04068 (RT), а стартовый капитал до комнатной температуры, в том числе неограниченный грант от научных исследований до предотвратить слепоту в Wayne State University, кафедра офтальмологии. JT была поддержана Томас К. Rumble стипендий, предоставляемых Wayne State университета Высшая школа.
UV light source | Leica | EL600 |
Glass Petri dish (150 x 20 mm) | Sigma-Aldrich/Pyrex | CLS3160152BO |
250 ml glass beaker | Sigma-Aldrich/Pyrex | CLS1000250 |
4 L glass beaker | Sigma-Aldrich/Pyrex | CLS10004L |
Aluminum foil | Fisher | 01-213-105 |
250 W halogen lamps | Workforce | 265-669 |
1.8 L clear acrylic tanks | Aquaneering | ZT180T |
1.8 L clear acrylic tank lids | Aquaneering | ZT180LCL |
Fan | Honeywell | HT-900 |
Aerator | Tetra | 77853-900 |
Thermometer | Cole-Parmer | YO-08008-58 |
Bent forceps (5/45) | World Precision Instruments | 504155 |