التغلب على عدم التجاوب في التجارب الذاتية التهاب الدماغ (EAE) سلالات الفئران المقاومة للنقل بواسطة بالتبني والتحدي الأنتيجين
Summary
سلالات الفئران معينة قادرة على مقاومة تحريض التهاب الدماغ والنخاع الذاتية التجريبية (EAE) مع البروتين الأساسي المايلين. الموصوفة هنا هو بروتوكول تحصين بسيط هو أن يعكس عدم تجاوب ويستحث مرض شلل في نموذجي EAE عدة بقع الفأر المقاوم.
Abstract
التهاب الدماغ والنخاع الذاتية التجريبية (EAE) هو مرض التهاب الجهاز العصبي المركزي (CNS)، وقد استخدمت في نموذج حيواني لدراسة هذا المرض المزيل للبشرية، والتصلب المتعدد (MS). ويتميز EAE بواسطة تسلل مرضية للخلايا وحيدات النوى في الجهاز العصبي المركزي والمظاهر السريرية للمرض مشلول. مشابهة لمرض التصلب العصبي المتعدد، EAE هو أيضا تحت السيطرة الوراثية في ذلك سلالات الفئران معينة تكون عرضة للتحريض المرض والبعض الآخر مقاومة. عادة، C57BL / 6 (H-2 ب) تحصين الفئران مع البروتين الأساسي المايلين (MBP) فشل لتطوير علامات مشلول. هذا تجاوب هي بالتأكيد ليست بسبب عيوب في التصنيع أو مستضد تقديم المستضد من MBP، كما تم استخدام بروتوكول تجريبي وصفها هنا للحث على EAE حاد في C57BL / 6 الفئران فضلا عن غيرها من سمعته الطيبة سلالات الفئران المقاومة. وبالإضافة إلى ذلك، قد دماغي المنشأ استنساخ الخلايا التائية من C57BL / 6 و BALB / ج الفئران على رد الفعل إلى MBP كان نجاحمعزولة تماما وترويجها.
بروتوكول تجريبي ينطوي على استخدام الخلوي نظام نقل بالتبني الذي MBP-معبي (200 ميكروغرام / الماوس) معزولة C57BL / 6 خلايا العقدة الليمفاوية المانحة وتربيتها لمدة خمسة أيام مع مستضد إلى توسيع مجموعة خلايا تي MBP محددة. في نهاية الفترة والثقافة، ويتم نقل 50000000 خلايا قابلة للحياة إلى المتلقين مسانج ساذج عن طريق الوريد الذيل. الفئران المعالجة لذلك المتلقي عادة لا تتطور EAE، مما يؤكد وضعهم المقاومة، وأنها يمكن أن تبقى إلى أجل غير مسمى طبيعي. عشرة أيام نقل الخلية آخر، هي الطعن الفئران المتلقي مع مساعد فرويند الكامل (CFA)، مستحلب MBP في أربعة مواقع في جنباته. EAE حاد يبدأ في تطوير هذه الفئران 10-14 يوما بعد التحدي. وأظهرت النتائج أن الاستقراء من مرض معين كان المستضدية كما تحد مع مستضدات غير ذي صلة لم لحث على العلامات السريرية للمرض. بشكل ملحوظ، والمعايرة من الجرعة المستخدمة لمستضدتحدي أظهرت الفئران المتلقي أنه يمكن أن يكون ما يصل الى 5 ميكروغرام / الماوس. وبالإضافة إلى ذلك، أظهرت دراسة الحركية للتوقيت التحدي مستضدي هذا التحدي للحث على المرض كانت فعالة في أقرب وقت آخر 5 أيام التحدي المستضدية وطالما أن أكثر من 445 يوما آخر مستضدي التحدي. هذه البيانات نقطة بقوة نحو تورط "طويلة الأمد" سكان الخلية تي في الحفاظ على عدم استجابتها. لم يتم تعريف اشتراك الخلايا التائية التنظيمية (Tregs) في هذا النظام.
Protocol
Discussion
دراسات من EAE في الفئران غالبا ما تستخدم في neuroantigens، المايلين الأساسية البروتين (MBP)، بروتين شحم بروتيني (حزب العمال التقدمي)، أو بروتين النخاعين oligodendrocyte (موج). دراسات سابقة تستخدم في الغالب MBP. حزب العمال التقدمي يحفز استجابات قوية وثابتة من الفئران SJL. وفي الآونة الأخي?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
معتمدة في جزء من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (R01 NS37253 وNS055167 N01) والجمعية الوطنية لمرض التصلب العصبي المتعدد (RG-3288 A6).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Guinea pig spinal cords | Rockland Immuno-chemicals, Inc. Gilbertsville, PA 19525 www.rockland-inc.com |
GP-T065 | frozen |
| Freund’s Adjuvant, complete H37Ra | Difco Laboratories Detroit, MI |
231131 | |
| Multifit interchange-able syringe | B-D www.bd.com/us |
512133 | |
| RPMI 1640 | Mediatech Inc. Manassas, VA www.cellgro.com |
10-040-CM | |
| OVA | Sigma-Aldrich www.sigmaaldrich.com |
A5503 | |
| Mice | Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine |
B6 mice: 0000664 |
References
- Swanborg, R. H., Sabato, G. D. Experimental allergic encephalomyelitis. Methods in Enzymology. 162, 413-421 (1988).
- Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. Induction of myelin basic protein-specific experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice: Mapping of T cell epitopes and T cell Vb gene segment usage. J. Neuroscience Research. 45, 690-699 (1996).
- McCarron, R., McFarlin, D. E. Adoptively transferred experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL/J, PL/J, and (SJL/J x PL/J)F1 mice. Influence of I-A haplotypes on encephalitogenic epitope of myelin basic protein. J. Immunol. 141, 1143-1149 (1988).
- Shaw, M. K., Kim, C., Ho, K. -. L., Lisak, R. P., Tse, H. Y. A combination of adoptive transfer and antigenic challenge induces consistent murine experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice and other reputed resistant strains. J. Neuroimmunol. 39, 139-150 (1993).
- Krishnamoorthy, G., Saxena, A., Mars, L. T., Domingues, H. S., Mentele, R., Ben-Nun, A., Lassmann, H., Dornmair, K., Kurschus, F. C., Liblau, R. S., Wekerle, H. Myelin-specific T cells also recognize neuronal autoantigen in a transgenic mouse model of multiple sclerosis. Nat. Med. 15, 626-632 (2009).
- Anderson, A. C., Reddy, J., Nazareno, R., Sobel, R. A., Nicholson, L. B., Kuchroo, V. K. IL-10 plays an important role in the homeostatic regulation of the autoreactive reperteroire in naïve mice. J. Immunol. 173, 828-834 (2004).
- Anderton, S. M. Treg and T-effector cells in autoimmune CNS inflammation: a delicate balance easily disturbed. Eur. J. Immunol. 40, 332-334 (2010).
- Arnon, R. Experimental allergic encephalomyelitis – susceptibility and suppression. Immunol. Rev. 55, 5 (1981).
- Billiau, A., Heremans, H., Vandekerckhove, F., Dijkmans, R., Sobis, H., Meulepas, E., Carton, H. Enhancement of experimental allergic encephalomyelitis in mice by antibodies against IFN-g. J. Immunol. 140, 1506-1510 (1988).
- Arbomson-Leeman, S., Alexander, J., Bronson, R., Corroll, J., Southwood, S., Dorf, M. Experimental autoimmune encephalomyelitis-resistant mice have highly encephalitogenic myelin basic protein (MBP)-specific T cell clones that recognize a MBP peptide with high affinity for MHC class II. J. Immunol. 154, 388-398 (1995).
- Reddy, J., Illes, Z., Zhang, X., Encinas, J., Nicholson, L., Sobel, R. A., Wucherpfennig, K. W., Kuchroo, V. K. Myelin proteolipid protein-specific CD4+CD25+ regulatory cells mediate genetic resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 15434-15439 (2004).
- Korn, T., Reddy, J., Gao, W., Bettelli, E., Awasthi, A., Petersen, T. R., Backstrom, B. T. Myelin- specific regulatory T cells accumulate in the CNS but fail to control autoimmune inflammation. Nature Med. 13, 423-431 (2007).
- Shaw, M. K., Li, J., Ho, P. P., Hao, H., Lisak, R. P., Tse, H. Y., Broglie, P. V. Induction of myelin basic protein-specific adoptive experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice. Longevity of donor T cells and lack of disease relapses. Neuroimmunology Research Focus. , 175-191 (2007).
