Kabul edilmiş Transfer ve antijenik Challenge Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis (EAE) Dayanıklı Fare Suşlarında yanıtsızlık Aşmak
Summary
Bazı fare suşlar miyelin temel protein olan deneysel otoimmün ensefalomyelit (EAE) indüksiyon karşı edebiliyoruz. Burada anlatılan yanıtsızlık tersine çevirir ve birkaç tipik EAE dirençli fare lekeler paralitik hastalığın neden basit bir bağışıklama protokoldür.
Abstract
Deneysel otoimmun ensefalomiyelit (EAE) merkezi sinir sistemi (MSS) iltihabi bir hastalıktır ve insan demyelinizan hastalığı, multipl skleroz (MS) çalışma için bir hayvan modeli olarak kullanılmaktadır. EAE MSS içine mononükleer hücrelerin patolojik infiltrasyonu ve paralitik hastalığın klinik bulgusu ile karakterizedir. Diğerleri dirençli iken MS benzer şekilde, EAE bazı fare suşları arasındaki genetik kontrolü altında da hastalığın oluşumunda duyarlıdır. Tipik olarak, C57BL / 6 (H-2 b) farelerde miyelin temel protein ile aşılanan (MBP) paralitik işaretleri geliştirmek için başarısız. Burada anlatılan deneysel bir protokol C57BL / 6 fareler gibi diğer tanınmış dirençli fare suşlarının ciddi EAE ikna etmek için kullanılmış olan bu cevapsızlık, kesinlikle antijen işleme veya MBP antijen sunumu hataları nedeniyle değil. Buna ek olarak, C57BL / 6 ve MBP reaktif Balb / c fareleri gelen encephalitogenic T hücre klonu başarılı olmuşturtamamen izole edilmiş ve yayılır.
Deneysel protokol (200 ug / fare) MBP-astarlanmış C57BL / 6 donör lenf düğümü hücreleri izole edilir ve MBP özel T hücrelerinin havuz genişletmek için antijen ile beş gün kültüre hangi bir hücresel adoptif aktarım sistemi kullanılarak içerir. Kültürü sürenin sonunda, 50000000 yaşayabilir hücrelerin kuyruk damarından vasıtasıyla Saf singeneik alıcı aktarılır. Bu yüzden normalde tedavi Alıcı fareler dolayısıyla dayanıklı durumu tazeleyen, EAE geliştirmek değil, onlar sonsuza kadar, normal kalabilir. On gün sonrası hücre nakli, alıcının fareler tam Freund adjuvan (CFA) emülsifiye yamaçlarında dört tesiste MBP ile zorlanmaktadır. Şiddetli EAE 10-14 gün, tehditten sonra bu farelerde gelişmeye başlar. Sonuçlar alakasız antijenleri ile meydan hastalığın klinik bulguları neden olmadı gibi hastalığın indüksiyon antijenik spesifik olduğunu gösterdi. Önemli ölçüde, antijene dozun bir titrasyonu için kullanılanmeydan alıcı farelerin, 5 mikrogram / fare gibi düşük olabileceğini göstermiştir. Ayrıca, antijenik meydan okuma bir zamanlama kinetik çalışmada hastalığın ikna etmek için, bu sorunu 5 gün sonrası antijenik meydan ve 445 gün sonrası antijenik meydan üzerinde olduğu sürece erken kadar etkili olduğunu gösterdi. Yanıtsızlık sağlanması bakımından önemli bir "uzun ömürlü" T hücre popülasyonunun katılımı yönünde Bu veriler, kuvvetli noktası. Bu sistem düzenleyici T hücreleri (Tregs) katılımı tanımlı değil.
Protocol
Discussion
Farelerde EAE çalışmaları genellikle neuroantigens, miyelin bazik protein (MBP), proteolipid protein (HUA) ya da miyelin oligodendrosit protein (MOG) kullanmaktadır. Daha önceki çalışmalarda çoğunlukla MBP kullanılır. PLP SJL farelerden güçlü ve tutarlı yanıtları uyarır. B6 fareler bu antijeni ile hastalığın oluşumunda duyarlı olması nedeniyle Daha yakın zamanlarda, MOG kullanılan ortak neuroantigen olduğunu. Gen hedeflenen fare suşlarının çoğu B6 genetik birikimine vardır. İlginçtir…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ulusal Sağlık Enstitüleri hibeler (R01 NS37253 ve N01 NS055167) ve Ulusal Multipl Skleroz Derneği (RG 3288-A6) tarafından kısmen desteklenmektedir.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Guinea pig spinal cords | Rockland Immuno-chemicals, Inc. Gilbertsville, PA 19525 www.rockland-inc.com |
GP-T065 | frozen |
| Freund’s Adjuvant, complete H37Ra | Difco Laboratories Detroit, MI |
231131 | |
| Multifit interchange-able syringe | B-D www.bd.com/us |
512133 | |
| RPMI 1640 | Mediatech Inc. Manassas, VA www.cellgro.com |
10-040-CM | |
| OVA | Sigma-Aldrich www.sigmaaldrich.com |
A5503 | |
| Mice | Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine |
B6 mice: 0000664 |
References
- Swanborg, R. H., Sabato, G. D. Experimental allergic encephalomyelitis. Methods in Enzymology. 162, 413-421 (1988).
- Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. Induction of myelin basic protein-specific experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice: Mapping of T cell epitopes and T cell Vb gene segment usage. J. Neuroscience Research. 45, 690-699 (1996).
- McCarron, R., McFarlin, D. E. Adoptively transferred experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL/J, PL/J, and (SJL/J x PL/J)F1 mice. Influence of I-A haplotypes on encephalitogenic epitope of myelin basic protein. J. Immunol. 141, 1143-1149 (1988).
- Shaw, M. K., Kim, C., Ho, K. -. L., Lisak, R. P., Tse, H. Y. A combination of adoptive transfer and antigenic challenge induces consistent murine experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice and other reputed resistant strains. J. Neuroimmunol. 39, 139-150 (1993).
- Krishnamoorthy, G., Saxena, A., Mars, L. T., Domingues, H. S., Mentele, R., Ben-Nun, A., Lassmann, H., Dornmair, K., Kurschus, F. C., Liblau, R. S., Wekerle, H. Myelin-specific T cells also recognize neuronal autoantigen in a transgenic mouse model of multiple sclerosis. Nat. Med. 15, 626-632 (2009).
- Anderson, A. C., Reddy, J., Nazareno, R., Sobel, R. A., Nicholson, L. B., Kuchroo, V. K. IL-10 plays an important role in the homeostatic regulation of the autoreactive reperteroire in naïve mice. J. Immunol. 173, 828-834 (2004).
- Anderton, S. M. Treg and T-effector cells in autoimmune CNS inflammation: a delicate balance easily disturbed. Eur. J. Immunol. 40, 332-334 (2010).
- Arnon, R. Experimental allergic encephalomyelitis – susceptibility and suppression. Immunol. Rev. 55, 5 (1981).
- Billiau, A., Heremans, H., Vandekerckhove, F., Dijkmans, R., Sobis, H., Meulepas, E., Carton, H. Enhancement of experimental allergic encephalomyelitis in mice by antibodies against IFN-g. J. Immunol. 140, 1506-1510 (1988).
- Arbomson-Leeman, S., Alexander, J., Bronson, R., Corroll, J., Southwood, S., Dorf, M. Experimental autoimmune encephalomyelitis-resistant mice have highly encephalitogenic myelin basic protein (MBP)-specific T cell clones that recognize a MBP peptide with high affinity for MHC class II. J. Immunol. 154, 388-398 (1995).
- Reddy, J., Illes, Z., Zhang, X., Encinas, J., Nicholson, L., Sobel, R. A., Wucherpfennig, K. W., Kuchroo, V. K. Myelin proteolipid protein-specific CD4+CD25+ regulatory cells mediate genetic resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 15434-15439 (2004).
- Korn, T., Reddy, J., Gao, W., Bettelli, E., Awasthi, A., Petersen, T. R., Backstrom, B. T. Myelin- specific regulatory T cells accumulate in the CNS but fail to control autoimmune inflammation. Nature Med. 13, 423-431 (2007).
- Shaw, M. K., Li, J., Ho, P. P., Hao, H., Lisak, R. P., Tse, H. Y., Broglie, P. V. Induction of myelin basic protein-specific adoptive experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice. Longevity of donor T cells and lack of disease relapses. Neuroimmunology Research Focus. , 175-191 (2007).
