Ex Vivo органотипической роговицы модели острой Эпителиальные Вирус простого герпеса I типа инфекции
Summary
В этом видео статье мы опишем использование нового<em> Бывших естественных условиях</em> Модели острого вируса простого герпеса типа I эпителия роговицы инфекции.
Abstract
Герпетический кератит является одним из самых тяжелых патологий, связанных с вирусом простого герпеса типа 1 (HSV-1). Герпетический кератит настоящее время является ведущей причиной как роговица-инфекции получены и связанных слепоты в развитых странах мира. Типичные презентации кератит герпеса включает в себя инфекцию эпителия роговицы, а иногда и более глубокие стромы роговицы и эндотелия, что приводит к такому постоянному роговицы патологий, как рубцы, истончения и прозрачность 1.
Роговицы HSV-1 инфекции традиционно изучается в двух типах экспериментальных моделей. В пробирке модель, в которой культурная монослоев эпителиальные клетки роговицы инфицированных в чашке Петри, предлагает простоту, высокую воспроизводимость, быстрый экспериментов, и относительно низких затратах. С другой стороны, в естественных условиях модель, в которой животные, такие как кролики или мыши прививку прямо в роговицу, предлагает весьма сложные физиологическиесистеме, но имеет более высокую стоимость, больше экспериментов, необходимых ухода за животными, и в большей степени изменчивости.
В этом видео статье, мы предоставляем подробную демонстрацию новых моделей естественных бывший роговичного эпителиального HSV-1 инфекции, которая сочетает в себе сильные стороны обоих в пробирке и в естественных условиях модели. Экс модели естественных использует нетронутой роговицы organotypically поддерживаться в культуре и инфицированных ВПГ-1. Использование бывшей моделью естественных условиях позволяет высоко физиологически обоснованные выводы, но это сравнительно недорогой и требует времени приверженность сравнима с моделью в пробирке.
Protocol
Discussion
В этом видео статье мы опишем метод изучения острых эпителия роговицы HSV-1 инфекции в бывшей моделью естественных условиях. Эта модель является полезной ступенью между в пробирке и в естественных условиях модели, поскольку она позволяет физиологически точную провер…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Поддержке Банка Lions глаз Delaware Valley был бесценен для этой работы. Первичные мышиные моноклональные антитела против ICP8 был своего рода подарок от доктора Дэвида Knipe (Harvard Medical School). Мы также благодарим д-р Стивен Дженнингс (Drexel University медицинский колледж) и д-р Питер Laibson (завещания Eye Institute) за полезные обсуждения и экспертизы.
Materials
| Reagents/Supplies | Company | Catalogue # |
| Minimum Essential Medium (MEM) | Mediatech | 10-010-CV |
| Non-Essential Amino Acids (100x solution) | Mediatech | 25-025-CI |
| L-Glutamine | Mediatech | 25-005-CI |
| Penicillin G Sodium Salt | Sigma | P3032 |
| Streptomycin Sulfate Salt | Sigma | S9137 |
| Agarose | Invitrogen | 15510-027 |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Prepared in lab | N/A |
| Trypsin EDTA (1x) | Mediatech | 25-053-CI |
| DNeasy Blood & Tissue Kit | QIAGEN | 69504 |
| RNeasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 |
| Laemmli Buffer | Prepared in lab | N/A |
| Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound | Tissue-Tek | 4583 |
| Whole Rabbit Eyes (Young) | Pel-Freez | 41211-2 |
| Human Corneas and Whole Eyes | Local Eye Bank | N/A |
| 12 Well Porcelain Spot Plate | Avogadro’s Lab Supply | 1877 |
| 35 mm Tissue Culture Dish | Falcon | 353001 |
| 6 Well Cell Culture Plate | Greiner Bio-One | 657160 |
| Cryomold Intermediate | Tissue-Tek | 4566 |
References
- Kaye, S., Choudhary, A. Herpes simplex keratitis. Prog. Retin. Eye Res. 25, 355-380 (2006).
- Holmberg, B. J. Enucleation of exotic pets. Journal of Exotic Pet Medicine. 16, 88-94 (2007).
- Remeijer, L., Osterhaus, A., Verjans, G. Human herpes simplex virus keratitis: the pathogenesis revisited. Ocul. Immunol. Inflamm. 12, 255-285 (2004).
- Foreman, D. M., Pancholi, S., Jarvis-Evans, J., McLeod, D., Boulton, M. E. A simple organ culture model for assessing the effects of growth factors on corneal re-epithelialization. Exp. Eye Res. 62, 555-564 (1996).
- Xu, K. P., Li, X. F., Yu, F. S. Corneal organ culture model for assessing epithelial responses to surfactants. Toxicol. Sci. 58, 306-314 (2000).
- Klausner, E. A., Peer, D., Chapman, R. L., Multack, R. F., Andurkar, S. V. Corneal gene therapy. J. Control Release. 124, 107-133 (2007).
- Halford, W. P. ICP0 antagonizes Stat 1-dependent repression of herpes simplex virus: implications for the regulation of viral latency. Virol. J. 3, 44 (2006).
- Bhattacharjee, P. S. Effective treatment of ocular HSK with a human apolipoprotein E mimetic peptide in a mouse eye model. Invest Ophthalmol Vis. Sci. 49, 4263-4268 (2008).
- Novitskaya, E. S. Difficulties imaging herpes simplex keratitis with fluorescein isothiocynate-labeled anti-HSV-1 antibodies in an ex vivo model. Cornea. 28, 421-425 (2009).
- Sharma, A., Shimeld, C. In vivo immunofluorescence to diagnose herpes simplex virus keratitis in mice. Br. J. Ophthalmol. 81, 785-788 (1997).
