خارج الحي النموذجي القرنية عضوي النمط من الهربس البسيط من النوع الحاد طلائي الفيروسات I العدوى
Summary
في هذه المقالة الفيديو وصفنا استخدام جديد<em> خارج الجسم</em> نموذج من الهربس البسيط من النوع الحاد فيروس العدوى الظهارية القرنية I.
Abstract
التهاب القرنية الهربس هو واحد من أشد الأمراض المرتبطة بفيروس الهربس البسيط من النوع 1 (HSV-1). التهاب القرنية الهربس هو حاليا السبب الرئيسي للعمى القرنية سواء المستمدة من العدوى المرتبطة بها وفي العالم المتقدم. عرض نموذجية من التهاب القرنية الهربس تشمل التهاب في ظهارة القرنية وأحيانا سدى القرنية أعمق والبطانة، مما يؤدي إلى الأمراض مثل القرنية كما تندب دائم، رقيق، والتعتيم 1.
تدرس تقليديا القرنية HSV-1 الإصابة في نوعين من النماذج التجريبية. ونموذج في المختبر، حيث يتم تربيتها من المصابين monolayers الخلايا الظهارية القرنية في طبق بتري، ويقدم بساطة، مستوى عال من التكرار والتجارب سريع، وتكاليف منخفضة نسبيا. من ناحية أخرى، فإن نموذج في الجسم الحي، حيث يتم تلقيح الحيوانات مثل الأرانب أو الفئران مباشرة في القرنية، ويقدم الفسيولوجية متطورة للغايةالنظام، ولكن لديه ارتفاع التكاليف، تعد التجارب، من الضروري رعاية الحيوانات، ودرجة أكبر من التباين.
في هذه المقالة الفيديو، ونحن نقدم مظاهرة مفصل لنموذج جديد من خارج الجسم القرنية الطلائية العدوى HSV-1، والذي يجمع بين نقاط القوة في كل من المختبر في وفي نماذج الجسم الحي. نموذج الجسم الحي السابقين يستخدم القرنيات سليمة الحفاظ organotypically في الثقافة والمصابين HSV-1. استخدام نموذج الجسم الحي السابقين يسمح للغاية من الناحية الفسيولوجية الاستنتاجات المستندة، ومع ذلك فهو غير مكلفة نوعا ما، ويتطلب التزاما زمنية مماثلة لتلك التي في النموذج المختبر.
Protocol
Discussion
في هذه المقالة الفيديو وصفنا طريقة لدراسة القرنية الطلائية الحاد HSV-1 الإصابة في نموذج الجسم الحي السابقين. هذا النموذج هو نقطة انطلاق مفيدة بين في المختبر والمجراة في نماذج، لأنه يسمح للمصادقة الناحية الفسيولوجية-دقيق لنتائج زراعة الخلايا، وبالتالي يحد م?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وكان ذلك بدعم من بنك العيون ليونز وادي ديلاوير لا تقدر بثمن لهذا العمل. كان الضد الأولية الماوس وحيدة النسيلة ضد ICP8 هدية عينية من الدكتور ديفيد Knipe (كلية هارفارد الطبية). نشكر أيضا الدكتور ستيفن جينينغز (جامعة دريكسيل كلية الطب) والدكتور بيتر Laibson (الوصايا معهد العيون) لإجراء مناقشات مفيدة والخبرات.
Materials
| Reagents/Supplies | Company | Catalogue # |
| Minimum Essential Medium (MEM) | Mediatech | 10-010-CV |
| Non-Essential Amino Acids (100x solution) | Mediatech | 25-025-CI |
| L-Glutamine | Mediatech | 25-005-CI |
| Penicillin G Sodium Salt | Sigma | P3032 |
| Streptomycin Sulfate Salt | Sigma | S9137 |
| Agarose | Invitrogen | 15510-027 |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Prepared in lab | N/A |
| Trypsin EDTA (1x) | Mediatech | 25-053-CI |
| DNeasy Blood & Tissue Kit | QIAGEN | 69504 |
| RNeasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 |
| Laemmli Buffer | Prepared in lab | N/A |
| Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound | Tissue-Tek | 4583 |
| Whole Rabbit Eyes (Young) | Pel-Freez | 41211-2 |
| Human Corneas and Whole Eyes | Local Eye Bank | N/A |
| 12 Well Porcelain Spot Plate | Avogadro’s Lab Supply | 1877 |
| 35 mm Tissue Culture Dish | Falcon | 353001 |
| 6 Well Cell Culture Plate | Greiner Bio-One | 657160 |
| Cryomold Intermediate | Tissue-Tek | 4566 |
References
- Kaye, S., Choudhary, A. Herpes simplex keratitis. Prog. Retin. Eye Res. 25, 355-380 (2006).
- Holmberg, B. J. Enucleation of exotic pets. Journal of Exotic Pet Medicine. 16, 88-94 (2007).
- Remeijer, L., Osterhaus, A., Verjans, G. Human herpes simplex virus keratitis: the pathogenesis revisited. Ocul. Immunol. Inflamm. 12, 255-285 (2004).
- Foreman, D. M., Pancholi, S., Jarvis-Evans, J., McLeod, D., Boulton, M. E. A simple organ culture model for assessing the effects of growth factors on corneal re-epithelialization. Exp. Eye Res. 62, 555-564 (1996).
- Xu, K. P., Li, X. F., Yu, F. S. Corneal organ culture model for assessing epithelial responses to surfactants. Toxicol. Sci. 58, 306-314 (2000).
- Klausner, E. A., Peer, D., Chapman, R. L., Multack, R. F., Andurkar, S. V. Corneal gene therapy. J. Control Release. 124, 107-133 (2007).
- Halford, W. P. ICP0 antagonizes Stat 1-dependent repression of herpes simplex virus: implications for the regulation of viral latency. Virol. J. 3, 44 (2006).
- Bhattacharjee, P. S. Effective treatment of ocular HSK with a human apolipoprotein E mimetic peptide in a mouse eye model. Invest Ophthalmol Vis. Sci. 49, 4263-4268 (2008).
- Novitskaya, E. S. Difficulties imaging herpes simplex keratitis with fluorescein isothiocynate-labeled anti-HSV-1 antibodies in an ex vivo model. Cornea. 28, 421-425 (2009).
- Sharma, A., Shimeld, C. In vivo immunofluorescence to diagnose herpes simplex virus keratitis in mice. Br. J. Ophthalmol. 81, 785-788 (1997).
