Livraison efficace de gènes dans les Territoires du SNC multiples à l'aide In Utero L'électroporation

La capacité de manipuler l'expression des gènes est la pierre angulaire de la journée embryologie moderne expérimentale, ce qui conduit à l'élucidation des multiples voies de développement. Plusieurs puissants et bien établis technologies transgéniques sont disponibles pour manipuler les niveaux de l'expression des gènes chez la souris, permettant la génération des deux perte et le gain de fonction des modèles. Cependant, la génération de souris transgéniques est à la fois coûteux et fastidieux. D'autres méthodes de manipulation génétique ont donc été largement sollicités. In utero électroporation est une méthode de transfert de gènes dans les embryons de souris ^1,2 que nous avons réussi à adapter ^3,4 vivre. Il est largement basé sur le succès de l'électroporation in ovo dans les technologies qui sont couramment utilisés dans chiches ^5. Brièvement, l'ADN est injecté dans les ventricules du cerveau ouverte développement et l'application d'un courant électrique provoque la formation de pores transitoires dans les membranes cellulaires, permettant l'absorption de l'ADN dans la cellule. Dans nos mains, les embryons peuvent être efficacement électroporées dès le jour embryonnaire (E) 11,5, tandis que le ciblage des jeunes embryons exigerait une guidée par échographie protocole de micro-injection, comme décrit précédemment ^6. Inversement, E15.5 est la dernière étape, nous pouvons facilement électroporation, en raison de l'apparition de la pariétale et la différenciation des os frontal, ce qui entrave la microinjection dans le cerveau. En revanche, la rétine est accessible par la fin de l'embryogenèse. Les embryons peuvent être recueillies à aucun moment pendant toute la période embryonnaire ou postnatale précoce. L'injection d'un journaliste de la construction facilite l'identification des cellules transfectées.

À ce jour, électroporation in utero a été plus largement utilisé pour l'analyse du développement du néocortex ^1,2,3,4. Des études plus récentes ont ciblé la rétine et le thalamus embryonnaire ^{7,8,9 10,11,12.} Ici, nous présentons une modification dans le protocole d'électroporation in utero qui peut être facilement adaptée pour cibler les différents domaines du système nerveux central embryonnaire. Nous fournir la preuve que en utilisant cette technique, nous pouvons cibler le télencéphale embryonnaire, diencéphale et la rétine. Les résultats représentatifs sont présentés, montrant d'abord l'utilisation de cette technique pour introduire des constructions d'expression d'ADN dans les ventricules latéraux, nous permettant de suivre la maturation progénitrices, la différenciation et la migration dans le télencéphale embryonnaire. Nous montrons également que cette technique peut être utilisée pour cibler l'ADN dans les territoires environnants diencéphalique le ventricule 3 ^ème, permettant les routes migratoires de différencier les neurones en noyaux diencéphalique à surveiller. Enfin, nous montrons que l'utilisation de micromanipulateurs nous permet d'introduire précisément constructions d'ADN dans les zones cibles légères, y compris l'espace sous-rétinien, nous permettant d'analyser les effets de la manipulation de l'expression des gènes sur le développement de la rétine.