Препарирование Мышь Око за полного горе пигментный эпителий сетчатки
Summary
Формальных демонстрации вскрытия мыши глаз, в результате чего целые горы пигментный эпителий сетчатки.
Abstract
Пигментный эпителий сетчатки (ПЭС), лежит в задней части глаза у млекопитающих, как раз под нейронных сетчатку, которая содержит фоторецепторы (палочки и колбочки). РПЭ является монослой пигментированные кубический клеток и в тесном сотрудничестве с партнерами нейронных сетчатки прямо над ним. Эта связь позволяет НПП представляет большой интерес для исследователей, изучающих заболеваний сетчатки. НПП также сайт в естественных условиях анализа гомологии направленной репарации ДНК, анализ р ед. Мышь глаз особенно трудно анализировать из-за своего небольшого размера (около 3,5 мм в диаметре) и его сферическую форму. В этой статье показано подробно процедура вскрытия глаз в результате чего целые горы ППД. В этой процедуре, мы покажем, как работать, а не против, сферические структуры глаза. Короче говоря, соединительной ткани, мышц и зрительного нерва, удаляются из задней части глаза. Затем, роговица и хрусталик удаляют. Далее, сокращения стратегических сделаны, что приводит к значительным уплощение остальные ткани. Наконец, нейронные сетчатки плавно взлетел, открывая нетронутыми ПЭС, которая по-прежнему присоединены к основному сосудистой оболочки и склеры. Вся эта установка может быть использована для выполнения анализа р ООН или для иммуногистохимии и иммунофлуоресценции оценки НПП ткани.
Protocol
Discussion
РПЭ является местом р ООН анализа, в естественных условиях анализа гомологии направленного ремонта. Анализ р ООН была использована для исследования влияния различных повреждений ДНК и ДНК 1,2 сигнализации повреждения и ремонт генов 3,4,5 от частоты ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Работа выполнена при поддержке Национального института гигиены окружающей среды наук [K22ES012264 к AJRB] и Американского онкологического общества InstitutionalResearch Грант [ACS-IRG-00-173-04] пилот projectaward [к AJRB]. Мы также благодарим членов лаборатории епископа для критическое прочтение рукописи и замечания по видео-и Адам Браун в частности, для примера того, что не надо делать. Мы благодарим д-р Дональд McEwen исследования рака Greehey Детский Института позволяет нам использовать его рассекает сферу / видео настройки камеры для съемки вскрытия видео. Мы благодарим Дарон Брауна в Корте Инструменты для заточки и ремонта наши инструменты микродиссекции.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| straight forceps | Roboz | RS-4903 | tip: .08 x .04 mm material: INOX | |
| 45° forceps | Roboz | RS-5005 | tip: .05 x.01 mm material: INOX | |
| 15° “up” forceps | Roboz | RS-5045A | tip: .1 x.06 mm material: INOX | |
| spring scissors | Roboz | RS-5604 | comb. tip width 0.3mm cutting edge length 3mm material: stainless steel | |
| binocular dissecting microscope | Ziess | Discovery V.8 | use reflected light source | |
| phalloidin | Invitrogen | A22283 | Alexa Fluor 546 |
References
- Bishop, A. J., Kosaras, B., Sidman, R. L., Scheistl, R. H. Benzo(a)pyrene andX-rays induce reversions of the pink-eyed unstable mutation in the retinal pigmentepithelium of mice. Mutat. Res.. 457, 31-31 (2000).
- Reliene, R. H. l. a. v. a. c. o. v. e., Mahadevan, A., Baird, B., M, W., Schiestl, R. H. Diesel exhaust particles cause increased levels of DNA deletions after transplacental exposure in mice. Mutat. Res. 570, 245-2452 (2005).
- Bishop, A. J., Barlow, C., Wynshaw-Boris, A. J., Scheistl, R. H. Atm deficiency causes increased frequency of intrachromosomal homologous recombination in mice. Cancer Res. 60, 395-399 (2000).
- Brown, A. D., Claybon, A. B., Bishop, A. J. Mouse WRN helicase domain is not required for spontaneous homologous recombination-mediated DNA deletion. J. Nucleic Acids. , (2010).
- Claybon, A., Karia, B., Bruce, C., Bishop, A. J. PARP1 suppresses homologous recombination events in mice in vivo. Nucleic Acids Res. , (2010).
- Bishop, A. J. p53-, and Gadd45a-deficient mice show an increased frequency ofhomologous recombination at different stages during development. Cancer Res. 63, 5335-5343 (2003).
- Bodenstein, L., Sidman, R. L. Growth and development of the mouse retinalpigment epithelium. Part I. Cell and tissue morphometrics and topography of mitoticactivity. Dev Biol. 121, 192-204 (1987).
- Burke, J. M. Epithelial phenotype and the RPE: is the answer blowing in the Wnt?. Prog Retin. Eye Res. 27, 579-595 (2008).
