Grabaciones de patch clamp de neuronas de ratón de retina en una rebanada preparación adaptada a la oscuridad
Summary
Aquí se describe un procedimiento para la generación adaptada a la oscuridad rebanadas de la retina del ratón de los registros electrofisiológicos.
Abstract
Nuestra experiencia visual se inicia cuando el pigmento visual en nuestra fotorreceptores de la retina absorbe fotones de energía de la luz e inicia una cascada de eventos intracelulares que llevan a la clausura de nucleótidos cíclicos, los canales con compuertas en la membrana celular. El cambio resultante en el potencial de membrana a su vez conduce a una reducción en la cantidad de la liberación de neurotransmisores de los dos terminales de la barra y cono sináptica. Para medir cómo el cambio de luz-evocada en el potencial de membrana del fotorreceptor conduce a la actividad posterior de la retina, los científicos han hecho registros electrofisiológicos de las preparaciones parte de la retina para 1,2 años. En el pasado estos cortes se han reducido de forma manual con una hoja de afeitar en el tejido de la retina que se une a un papel de filtro, en los últimos años otro método de corte ha sido desarrollado por el cual el tejido retinal está incrustado en agar de baja temperatura de gelificación y en rodajas en una solución fría con un vibración micrótomo 3,4. Esta preparación produce cortes de la retina con menos daños en la superficie y las respuestas evocadas por la luz muy fuerte. Aquí se documenta cómo este procedimiento puede realizarse bajo la luz infrarroja para evitar la decoloración del pigmento visual.
Protocol
Discussion
Grabación de sector a partir de las retinas de vertebrados se han hecho durante décadas 1,2, y han tenido bastante éxito en la prestación de un mejor entendimiento de cómo los circuitos de la retina codifica la luz incidente. Las ventajas del corte con un micrótomo de vibración en lugar de hacerlo directamente con una hoja de afeitar es que las rodajas de la retina incurrir en un menor daño en la superficie. Con una pipeta de succión que es fácil de quitar estos daños y las células diana sano deba…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por el NIH subvención EY17606 (APS).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Borosilicate glass | Sutter Instruments | B120-69-10 | ||
| Polyethylene tubing | Intramedic | PE205 | ||
| Agar | Sigma | A7002 | ||
| Low gelling temp agarose | Sigma | A0701 | ||
| Ames’ Medium | Sigma | A1420 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Sigma | P0781 |
References
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