Enregistrements Patch Clamp à partir de neurones rétiniens souris dans une préparation adaptés à l'obscurité Slice
Summary
Nous décrivons ici une procédure pour générer adaptés à l'obscurité des tranches de la rétine de souris pour les enregistrements électrophysiologiques.
Abstract
Notre expérience visuelle est déclenchée lorsque le pigment visuel dans nos photorécepteurs rétiniens absorbe les photons d'énergie de la lumière et déclenche une cascade d'événements intracellulaires qui conduisent à la fermeture de nucléotide cyclique-dépendants des canaux dans la membrane cellulaire. Le changement résultant dans le potentiel de membrane entraîne à son tour une réduction du montant de la libération des neurotransmetteurs à la fois de la tige et les terminaux cône synaptique. Pour mesurer la façon dont le changement de lumière évoquée dans le potentiel de membrane des photorécepteurs conduit à une activité en aval dans la rétine, les scientifiques ont fait des enregistrements électrophysiologiques de préparations tranche de la rétine pour 1,2 décennies. Dans le passé, ces tranches ont été coupées manuellement avec une lame de rasoir sur le tissu rétinien qui est attaché à un papier filtre; ces dernières années une autre méthode de découpage a été développé selon lequel le tissu rétinien est intégré dans l'agar gélifiant à basse température et tranchées dans une solution fraîche avec un vibrant microtome 3,4. Cette préparation produit des tranches de la rétine avec moins de dommages de surface et des réponses très robuste lumière évoquée. Ici nous montrons comment cette procédure peut être faite sous une lumière infrarouge pour éviter le blanchiment du pigment visuel.
Protocol
Discussion
L'enregistrement tranche de rétines de vertébrés ont été faites depuis des décennies 1,2, et ont assez bien réussi à fournir une compréhension plus profonde de la façon dont les circuits rétiniens encode la lumière incidente. Les avantages de la coupe avec un microtome vibrant plutôt que directement avec une lame de rasoir, c'est que les tranches de la rétine encourent moins de dégâts à la surface. Avec une pipette d'aspiration, il est facile d'enlever ces dommages et les cell…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par des subventions du NIH EY17606 (APS).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Borosilicate glass | Sutter Instruments | B120-69-10 | ||
| Polyethylene tubing | Intramedic | PE205 | ||
| Agar | Sigma | A7002 | ||
| Low gelling temp agarose | Sigma | A0701 | ||
| Ames’ Medium | Sigma | A1420 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Sigma | P0781 |
References
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