Decellulariserende Mammary Fat Pads: Afleiden van Extracellulaire Matrix Hydrogels van Mammary Fat Pads
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Alves et. al., Het bestuderen van normale weefselstralingseffecten met behulp van extracellulaire matrixhydrogels. J. Vis. Exp. (2019).
Deze video beschrijft een techniek om extracellulaire matrixhydrogels af te leiden door muriene melkzuurkussens te decellulariseren na ex vivo bestraling voor in vitro studies. Deze hydrogel helpt bij het nabootsen van de in vivo borstweefselomgeving na de bestraling om het gedrag van tumorcellen te bestuderen.
Protocol
1. Decellularisatie OPMERKING: Deze procedure werd aangepast van eerder gepubliceerde methoden gericht op vetdecellularisatie, waaronder het natriumdeoxycholaat ionische wasmiddel in plaats van natriumdodecylsulfaat om DNA efficiënt te verwijderen. Verwijder op dag 1bevroren Mammary Fat pads of MFPs van -80 °C en ontdooi bij kamertemperatuur. Eenmaal ontdooid, droog mvp’s kort op een delicate taak veeg. Weeg de MSP’s af met behulp…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 10% Neutral Buffered Formalin, Cube with Spigot | VWR | 16004-128 | |
| 2-methylbutane | Alfa Aesar | 19387 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A1933-25G | |
| Dulbecco's phosphate-buffered saline | Gibco | 14040133 | |
| Fisher Healthcare Tissue-Plus O.C.T. Compound | Fisher Scientific | 23-730-571 | cryostat embedding medium |
| Kimtech Science Kimwipes | Kimberly Clark | delicate task wipes | |
| n-Propanol (Peroxide-Free/ Sequencing), Fisher BioReagents | Fisher Scientific | BP1130-500 | |
| PBS (10X), pH 7.4 | Quality Biological, Inc. | 119-069-151 | Phosphate-buffered saline |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| Peracetic acid | Sigma-Aldrich | 77240-100ML | |
| Triton x-100 | Sigma-Aldrich | X100-100ML | t-Octylphenoxypolyethoxyethanol |
| Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | Gibco | 25200-056 | |
| Richard-Allan Scientific Signature Series Hematoxylin 7211 | Richard-Allan Scientific | 7211 | |
| Whatman qualitative filter paper, Grade 4 | Whatman | 1004-110 | grade 4 qualitative filter paper |
| Xylenes (Certified ACS), Fisher Chemical | Fisher Scientific | X5-5 |
Cite This Article
Decellularizing Mammary Fat Pads: Deriving Extracellular Matrix Hydrogels from Mammary Fat Pads. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20229, doi: (2023).