Denne videoen beskriver en myk agar koloni formasjon analyse for å teste effekten av en PADI enzymhemmer og BB-Cl-amidine på brystkreft tumorigenicity in vitro. Denne analysen muliggjør også kvantitativ vurdering av celletransformasjonspotensial innenfor konteksten av genetiske perturbasjoner.
Protocol
1. Tilberedning av 3% 2-Hydroksyetyl Agarose I en ren, tørr 100 ml glassflaske, tilsett 0,9 g 2-hydroksyetyl agarose (Agarose VII) etterfulgt av 30 ml destillert vann. Mikrobølgeovn blandingen i 15 sek og virvle forsiktig. Gjenta dette trinnet minst tre ganger til agarosepulveret helt oppløses. Autoklaver den løsningsholdige flasken i 15 min. La agaroseløsningen avkjøles til RT før videre bruk. Oppbevar løsningen hos RT. 2. Forberedelse av bu…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
Zeiss Axiopot
Carl Zeiss Microscopy
1021859251
Inverted Microscope
Olympus
CKX41
DMEM/F-12
Lonza BioWhittaker
12-719F
HyClone Donor Equine Serum
Fisher Scientific
SH30074.03
Penicillin Streptomycin
Life Technologies
15140-122
2-Hydroxyethylagarose: Type VII, low gelling temperature
Soft Agar Colony Formation Assay: A Method to Test Effects of Novel Compounds on Cancer Cell Proliferation. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20226, doi: (2023).